Efectele acidului picric (2,4,6-trinitrofenol) și ale unei substanțe chimice de descurajare a mușcăturilor (denatoniu)

Abstract

Denervarea membrului posterior este o tehnică utilizată pentru a studia regenerarea nervului periferic. Autotomia sau autofagia este un răspuns nedorit la denervare în astfel de studii. Aplicarea unei loțiuni disponibile în comerț, folosită pentru a descuraja mușcătura unghiilor la oameni, a redus autotomia la șobolani după denervare, dar nu a prevenit-o complet. În acest studiu, acești autori au evaluat aplicarea acidului picric pentru a preveni autotomia la șobolani în experimentele cu nervii periferici. Au efectuat tranziția nervului sciatic la 41 de șobolani femele adulți Wistar și apoi au aplicat fie loțiune de descurajare a mușcăturii ( = 26) sau soluție saturată de acid picric = 15) local pe membrele posterioare afectate imediat după operație și în fiecare zi timp de 1 lună. Scorurile de autotomie au fost mai mici pentru șobolanii tratați cu acid picric decât pentru șobolanii tratați cu loțiune de descurajare a mușcăturilor la 1 săptămână și la 2 săptămâni după operație, dar nu au fost diferite între cele două grupuri la 4 săptămâni după operație. Autorii concluzionează că aplicarea acidului picric ar putea fi utilizată ca o strategie alternativă pentru a preveni autotomia în studiile nervilor periferici.

Studiile de regenerare a nervilor periferici au folosit frecvent transecția nervului sciatic la șobolani ca model pentru experimentele translaționale 1,2. Autotomia este un răspuns nedorit în aceste studii care a fost descris pentru prima dată în 1979 ca un comportament care provoacă auto-mutilarea după denervarea completă a membrului posterior datorită durerii neuropatice spontane, disesteziei și paresteziei 3,4,5. Autotomia afectează de obicei degetele de la picioare ale membrului denervat și poate afecta negativ rezultatele evaluărilor nervului sciatic. De exemplu, indicele funcțional sciatic (SFI) evaluează membrul posterior al unui șobolan examinând amprentele sale 6. Amputarea unui deget ar putea modifica amprenta animalului și rezultatele SFI, ducând la excluderea acestuia din studiu 7 .

Deoarece diferite mecanisme stau la baza autotomiei în leziunile centrale și periferice 26,27, ne-am propus să evaluăm efectele acidului picric asupra autotomiei într-un model de leziune a nervului periferic și să le comparăm cu cele ale unei loțiuni de prevenire a mușcăturilor.

Metode

Design de studiu

Am folosit 41 de șobolani femele adulți Wistar (obținuți de la Razi Institute, Karaj, Iran) cu o greutate de 200-250 g în momentul operației. Șobolanii au fost adăpostiți în grupuri de câte patru pe cușcă (RRP30C, Razi Rad Co., Teheran, Iran) cu acces gratuit la alimente (Pars Animal Feed Co., Teheran, Iran) și apă potabilă într-o cameră cu temperatură controlată, cu 12- h: 12-h lumină: ciclu întunecat. Am efectuat o tranziție a nervului sciatic la toți șobolanii și apoi le-am tratat fie cu loțiune de descurajare a mușcăturii ( = 26) sau acid picric = 15) timp de 1 lună. Observatorii care au fost orbi la grupurile de tratament au înregistrat scoruri de autotomie pentru fiecare șobolan la 1 săptămână, 2 săptămâni și 4 săptămâni după operație. Toate experimentele au fost făcute cu aprobarea comitetului de etică al Universității de Științe Medicale din Iran (Iran).

Procedura chirurgicala

Fiecare șobolan a fost anesteziat cu un amestec de ketamină (100 mg per kg greutate corporală; clorhidrat de ketamină, Rotexmedica, Germania) și xilazină (5 mg per kg greutate corporală; xilazină 2%, Alfasan, Woerden, Olanda). Membrul posterior drept al șobolanului a fost ras și dezinfectat cu soluție de povidonă-iod. Nervul sciatic drept a fost expus ușor prin disecția musculară gluteală în condiții aseptice și un segment de 2 cm al nervului sciatic a fost transectat la nivelul coapsei mijlocii. Mușchiul și fascia au fost închise cu suturi vicryl simple 4-0, iar pielea a fost închisă cu o sutură continuă de nailon 4-0. Cefazolin (30 mg, Cefazex, Exir Pharmaceutical Co., Teheran, Iran) a fost administrat prin injecție subcutanată și soluție salină normală (5 ml, 0,9% Darou Pakhsh, Teheran, Iran) a fost administrată prin injecție intraperitoneală. Toate procedurile au fost efectuate de același chirurg instruit.

Tratamentul de prevenire a autotomiei

Am tratat 26 de șobolani cu o loțiune comercială de descurajare a mușcăturilor cu ingredientul activ benzoat de denatoniu (Nail Bite, J. Pickles and Sons, Knaresborough, Marea Britanie) și am tratat 15 șobolani cu o soluție apoasă saturată (1,3%) de acid picric (2, 4,6-trinitrofenol, Sigma-Aldrich Co., St. Louis, MO). Am aplicat aproximativ 0,5 ml din fiecare soluție pe tot piciorul denervat (de la vârfurile degetelor de la picioare până la șold) cu o perie mică imediat după operație și în fiecare zi timp de 1 lună. Odată uscat, acidul picric a lăsat o acoperire galbenă pe piele, în timp ce loțiunea care împiedică mușcătura a format un strat incolor.

Șobolanii au fost observați individual cel puțin o dată pe zi, cu o atenție deosebită în prima zi. Am căutat modificări ale pielii, blănii, ochilor, mucoaselor, respirației și comportamentului 28. Am monitorizat greutatea corporală, salivația, lacrimarea, urinarea, defecația, discordinația mersului, tremurături, mișcări tonico-clonice sau stereotipe, modificări ca răspuns la manipularea și modelul de somn 28. Am căutat orice modificare a culorii urinei (în special urina neagră) deoarece aproximativ 88% din acidul picric este excretat cu urina 29 .

Scoruri de autotomie

Scorurile de autotomie pentru fiecare șobolan au fost calculate la 1 săptămână, 2 săptămâni și 4 săptămâni după intervenția chirurgicală, așa cum s-a descris anterior 3,30,31,32 de către un tehnician instruit care nu știa de proiectarea studiului și a tratamentelor. Au fost înregistrate leziuni, ulcere și mutilări la fiecare membru posterior. Un punct a fost atribuit pentru îndepărtarea unuia sau mai multor unghii, pentru fiecare leziune la jumătatea distală a degetului și pentru fiecare leziune la jumătatea proximală a degetului. Scorul total maxim pentru fiecare membru posterior a fost de 11 (Fig. 1).

acidului

Reprodus cu permisiunea ref. 35.

analize statistice

Am folosit software-ul SPSS (versiunea 19.0; IBM Corp., Armonk, NY) pentru analiza statistică. Am comparat scorurile medii de autotomie între cele două grupuri la fiecare moment, folosind testul U Mann-Whitney. De asemenea, am efectuat un test ANOVA al lui Friedman pentru analiza tendințelor de timp ale fiecărui grup. valori

Rezultate

Nu a fost detectată nicio modificare a fiziologiei sau comportamentului la niciunul dintre șobolani și niciun șobolan nu a murit în timpul experimentelor. Șobolanii din ambele grupuri implicate în autotomie (Fig. 2). Scorurile medii de autotomie au fost mai mici la șobolanii tratați cu acid picric decât la șobolanii tratați cu loțiune de descurajare a mușcăturilor în toate cele trei momente de timp: 0,267 față de 3,231 la 1 săptămână după operație, 0,538 față de 3,654 la 2 săptămâni după operație și 0,636 față de 3,346 la 4 săptămâni după operație (Fig. 3). Aceste diferențe au fost semnificative la 1 săptămână (U = 84,00, = 0,001, r = -0,51) și 2 săptămâni (U = 72,50, = 0,002, r = -0,46) după operație, dar nu la 4 săptămâni după operație (U = 96,50, = 0,124, r = -0,27; FIG. 3). Analiza timp-tendință a arătat că scorurile de autotomie în cadrul fiecărui grup nu s-au modificat semnificativ în perioada de 4 săptămâni (acid picric, χ 2 (2) = 4,00, = 0,135; loțiune de descurajare a mușcăturii, χ 2 (2) = 2,80, = 0,247).

(A) La acest șobolan tratat cu acid picric, s-a dat un scor de autotomie de 1 pentru îndepărtarea unghiilor. () La acest șobolan tratat cu loțiune de descurajare a mușcăturii, s-a dat un scor de autotomie de 7, un punct pentru îndepărtarea unghiilor și șase puncte pentru rănirea completă a trei degete.