Dezvoltarea și caracterizarea unui model experimental de sindrom metabolic indus de dietă în

Affiliations Health Research Institute (INCLIVA), Valencia, Spania, Departamentul de fiziologie, Universitatea din Valencia, Valencia, Spania

Departamentul de afiliere pentru patologie, Universitatea din Valencia, Valencia, Spania

Departamentul de afiliere pentru fiziologie, Universitatea din Valencia, Valencia, Spania

Afiliere UCIM, Universitatea din Valencia, Valencia, Spania

Departamentul de afiliere pentru fizioterapie, Universitatea din Valencia, Valencia, Spania

Affiliations Health Research Institute (INCLIVA), Valencia, Spania, Departamentul de Patologie, Universitat de Valenència, Valencia, Spania

Afilieri Health Research Institute (INCLIVA), Valencia, Spania, Departamentul de Cardiologie, Spitalul Clinic din Valencia, Valencia, Spania, CIBERCV, Instituto de Salud Carlos III, Madrid, Spania

Departamentul de afiliere pentru fiziologie, Universitatea din Valencia, Valencia, Spania

Departamentul de afiliere pentru fizioterapie, Universitatea din Valencia, Valencia, Spania

Oscar Julián Arias-Mutis,
Vannina G. Marrachelli,
Amparo Ruiz-Saurí,
Antonio Alberola,
Jose Manuel Morales,
Luis Such-Miquel,
Daniel Monleon,
Francisco J. Chorro,
Luis Such,
Manuel Zarzoso

Cifre

Abstract

Stabilirea unui model experimental adecvat este necesară pentru a obține o înțelegere a remodelării care are loc în diferite organe și sisteme. Până în prezent, în cazul MetS, au fost utilizate puține modele de iepuri induse de dietă care utilizează diete bogate în grăsimi și bogate în zaharoză [12-16] și cel mai important, nu a fost detaliată o caracterizare a diferitelor componente ale MetS. Acest lucru este de o mare importanță atunci când relaționează un fenotip cu remodelarea organelor. Astfel, obiectivul nostru principal este să dezvoltăm și să caracterizăm un model experimental de MetS indus de dietă la iepuri care ar permite ulterior studiul remodelării cardiovasculare și a aritmogenezei.

Material si metode

Animale și diete

Măsurători morfologice

Măsurătorile corporale au fost efectuate prin intermediul benzilor de măsurare și a unei scale de cântărire înainte de administrarea dietei experimentale și la săptămânile 14 și 28. Au fost determinate lungimea corpului, înălțimea, lungimea tibială, circumferința abdominală și raportul circumferința abdominală/lungimea corpului. Greutatea corporală a fost măsurată săptămânal. Indicele de masă corporală (IMC) a fost calculat ca greutate corporală (kg) [lungimea corpului (m) × înălțimea (m)] -1 [17].

Test de glicemie și toleranță la glucoză

Măsurătorile de glucoză în repaus s-au făcut înainte de administrarea dietei experimentale și în săptămânile 14 și 28 cu un glucometru (Contour Next, Bayer, Leverkusen, Germania). Pentru evaluarea metabolismului glucozei, testul de toleranță intravenoasă la glucoză (IVGTT) a fost efectuat așa cum s-a descris anterior [11]. Pe scurt, iepurii au fost posti timp de 7 ore și apoi experimentul a început între orele 14-15. După canularea venei auriculare, s-a administrat un bolus dintr-o soluție de glucoză 60% (0,6 g kg -1) i.v. prin vena urechii marginale și au fost prelevate probe de sânge înainte și în diferite momente de timp după injecție (15, 30, 60, 90, 120 și 180 de minute). Glicemia a fost măsurată cu un glucometru (Contour Next, Bayer, Leverkusen, Germania). Zona de sub curbă (ASC) a fost calculată prin înmulțirea înălțimii medii cumulative a glucozei (mg dL -1) cu timpul (ore) [18].

Tensiune arteriala

Iepurii au fost reținuți într-un suport de plastic și, după aplicare locală anestezică locală (EMLA, Astra AstraZeneca, Madrid, Spania), artera auriculară centrală a fost canulată (Introcan 18G, Braun, Melsungen, Germania). Apoi, restricțiile au fost slăbite și iepurelui i s-a permis să stea liniștit timp de 20-30 de minute. Tensiunea arterială a fost înregistrată direct din cateterul arterial, folosind un traductor de presiune poziționat la nivelul inimii. Semnalul de la traductor (Model 60–3003, Harvard Apparatus, Holliston, MA) a fost amplificat, trimis la o unitate Power Lab (Power Lab 2/26, AD Instruments, Oxford, Marea Britanie) și apoi înregistrat la Labchart (ver. 6, AD Instruments, Oxford, Marea Britanie) cu o frecvență de eșantionare de 1 KHz. Datele au fost analizate folosind software personalizat și ultimele 5 minute dintr-o înregistrare de 20 de minute au fost procesate pentru a calcula presiunea arterială sistolică, diastolică și medie (MAP). Determinările au fost făcute în săptămânile 14 și 28.

Măsurători plasmatice

Probele de sânge au fost prelevate din vena auriculară în săptămâna 14 și 28. După 7 ore de post, probele au fost colectate în tuburi EDTA (BD Vacutainer, Plymouth, Marea Britanie), depozitate pe gheață și centrifugate (1500 g, 15 min, 4 ° C) . Apoi, plasma a fost obținută și depozitată într-un frigider la -80 ° C. Trigliceridele plasmatice, colesterolul total, HDL, LDL, transaminazele, gamma-glutamil transpeptidaza (GGT), acidul biliar, bilirubina, creatinina, ureea, proteinele totale, albumina, glucoza și creatin fosfokinaza (CPK) au fost determinate folosind proceduri enzimatice standard laborator (Immunovet, Barcelona, Spania).

Histologie

Țesutul hepatic a fost obținut de la 5 animale (martor n = 3, MetS n = 2). După premedicație cu ketamină (35 mg kg -1) și heparină (2500 UI), iepurii au fost eutanasiați cu o supradoză de pentobarbitonă de sodiu (100 mg kg -1). Apoi, ficatul a fost îndepărtat cu atenție și scufundat într-o soluție de formaldehidă de 4%, încorporată în parafină, secționată în serie în 5 μm, montată în lamele adezive și colorată cu hematoxilină și eozină. Am efectuat un studiu morfometric în 5 microfotografii pentru fiecare animal din zona venelor centrale, cu ajutorul unui microscop DMD108 (Leica Mircrosystems, Wetzlar, Germania) și un obiectiv de 40x. Image-Pro Plus 7.0 a fost utilizat pentru analiza imaginii și au fost cuantificați următorii parametri: numărul de hepatocite, aria și numărul de hepatocite cu conținut de vacuol lipidic.

Spectroscopie prin rezonanță magnetică nucleară (RMN)

analize statistice

Valorile sunt raportate ca media ± SD, cu excepția cazului în care se specifică altfel. Testul Shapiro-Wilk a fost efectuat pe toate variabilele pentru a evalua normalitatea distribuțiilor. Testul t nepereche și un model mixt ANOVA cu doi factori, unul dintre subiecți (timp) și unul între subiecți (grup), au fost folosiți pentru analiza statistică atunci când a fost cazul. Corecția Bonferroni a fost aplicată pentru comparații perechi. Diferențele au fost considerate semnificative la un nivel alfa cu două cozi de P Fig 1. Evoluția greutății în perioada experimentală.

Măsurarea săptămânală a greutății este afișată în panoul (A), în timp ce comparația creșterii în greutate în săptămânile 14 și 28 este afișată în panoul (B). Control (n = 12), MetS (n = 13), An = săptămână de aclimatizare, * p Tabelul 1. Caracteristici morfologice.

Aportul zilnic a fluctuat la animalele MetS în timpul celor 28 de săptămâni de administrare a dietei (variind între 716 și 374 kcal zi -1), în timp ce aportul în grupul de control a rămas constant, deoarece animalele au consumat în mod normal cele 120 g de chow furnizate pentru întreținere (Fig 2A) . Când s-a calculat valoarea medie a celor 28 de săptămâni, am obținut că iepurii MetS au ingerat cu 66,7% mai mult kcal decât martorii (537 ± 41 față de 322 ± 8 kcal zi -1, p Fig 2. Aportul de energie în grupurile experimentale.