Cancerul colorectal indus de obezitate este determinat de tăcerea calorică a paracrinei guanilină-GUCY2C

Jieru E. Lin

1 Departamentul de farmacologie și terapie experimentală, Divizia de farmacologie clinică, Universitatea Thomas Jefferson, Philadelphia, PA

Francheska Colon-Gonzalez

1 Departamentul de farmacologie și terapie experimentală, Divizia de farmacologie clinică, Universitatea Thomas Jefferson, Philadelphia, PA

Erik Blomain

1 Departamentul de farmacologie și terapie experimentală, Divizia de farmacologie clinică, Universitatea Thomas Jefferson, Philadelphia, PA

Gilbert W. Kim

1 Departamentul de farmacologie și terapie experimentală, Divizia de farmacologie clinică, Universitatea Thomas Jefferson, Philadelphia, PA

Amanda Aing

1 Departamentul de farmacologie și terapie experimentală, Divizia de farmacologie clinică, Universitatea Thomas Jefferson, Philadelphia, PA

Brian Stoecker

1 Departamentul de farmacologie și terapie experimentală, Divizia de farmacologie clinică, Universitatea Thomas Jefferson, Philadelphia, PA

Justin Rock

1 Departamentul de farmacologie și terapie experimentală, Divizia de farmacologie clinică, Universitatea Thomas Jefferson, Philadelphia, PA

Adam E. Snook

1 Departamentul de farmacologie și terapie experimentală, Divizia de farmacologie clinică, Universitatea Thomas Jefferson, Philadelphia, PA

Tingting Zhan

2 Departamentul de farmacologie și terapie experimentală, Divizia de biostatistică, Universitatea Thomas Jefferson, Philadelphia, PA

Terry M. Hyslop

3 Departamentul de Biostatistică și Bioinformatică, Universitatea Duke, Durham, NC

Michal Tomczak

4 Divizia de Gastroenterologie, Hepatologie și Endoscopie și Institutul de Cercetări Biomedice, Spitalul Brigham și Femeile și Centrul de Boli Digestive Harvard, Harvard Medical School, Boston, MA

Richard S. Blumberg

Scott A. Waldman

1 Departamentul de farmacologie și terapie experimentală, Divizia de farmacologie clinică, Universitatea Thomas Jefferson, Philadelphia, PA

Date asociate

Abstract

Introducere

Materiale și metode

Modele animale

(A) Construcție pentru expresia transgenică a guanilinei în intestin. Expresia transgenică de guanilină (B) a salvat semnalizarea GUCY2C reducând disfuncția epitelială indusă de o dietă HF și (C-D) a eliminat aproape complet tumorigeneză indusă de o dietă HF și AOM în colonii VilGuca2a +, dar nu a controlat șoarecii VilGuca2a-. Rezultatele imunoblot reprezintă media ± SEM a 5 șoareci. VilGuca2a (-), șoareci C57BL/6 care exprimă vil-Cre-ER T2 (guanylin wild type); Șoareci VilGuca2a (+), C57BL/6 care exprimă vil-Cre-ER T2 și care transportă transgenul guanylin.

Genotipare

Genotipul Gucy2c a fost confirmat prin PCR cu primeri: înainte: 5'-AGGTCATGACGTCACTGCTGGGCC-3 '; invers: 5'-TGTCCAGTCCTTCCTCCACAG-3 '; neomicină: 5'-GGTGGGCTCTATGGCTTC-3 '(7). Genotipul ROSA-STOP flox -Guca2a a fost confirmat prin PCR cu primeri: înainte: 5'-CCGCCGTTGTTGTTATTGTAG-3 '; invers: 5'-GTTGTGGTG ATAGGTGGCAAG-3 '. Genotipul Villin-Cre-ER T2 a fost confirmat prin PCR cu primeri: înainte: 5'-GAAAATGCTTCTGTCCGTTTG-3 '; invers: 5'-ATTGCTGTCACTTGGTCGTG-3 '(9).

Modelul tumorigenezei colorectale

Pentru șoareci Gucy2c +/+ (Lean, HF) și Gucy2c -/- (Lean), azoximetan (AOM 8 mg/kg; Sigma, St. Louis, MO) a fost administrat șoarecilor (vechi de 6 săptămâni) prin injecții intraperitoneale săptămânal pentru 6 săptămâni. Tumorile au fost enumerate și dimensiunile lor au fost cuantificate la 8 săptămâni după ultima doză de AOM sub un stereomicroscop prin disecție prin analiză orbită. Sarcina tumorală pe animal a fost calculată ca suma suprafeței (diametrul 2) a tumorilor individuale (7). Pentru modelul ROSA-STOP flox -Guca2a-vil-Cre-ER T2 și controalele corespunzătoare (Fig. 4c), șoarecii erau la dieta HF începând cu vârsta de 4 săptămâni. Tamoxifen (20 mg/kg IP) a fost administrat la fiecare 4 săptămâni pentru a impune expresia guanilinei începând de la 4 săptămâni până la enumerarea tumorii. Au fost administrate șase doze de AOM (10 mg/kg) săptămânal începând cu vârsta de 5 săptămâni. Tumorile au fost enumerate și dimensiunile lor au fost cuantificate la vârsta de 22 săptămâni (6, 7). Pentru șoarecii Gucy2c +/+ (Lean, HC), AOM (12 mg/kg) a fost administrat șoarecilor (cu vârsta de 6 săptămâni) săptămânal timp de 6 săptămâni. Tumorile au fost enumerate și dimensiunile lor au fost cuantificate la 12 săptămâni după ultima doză de AOM. Dozele de AOM în diferite modele de dietă au fost stabilite în studii pilot pentru a asigura cel puțin