Association Constant - o prezentare generală Subiecte ScienceDirect

Termeni asociați:

Antigen
Anticorpi
Proteină
pH
Constanta de disociere
Dioxid de carbon
Ligand

Descărcați în format PDF

Despre această pagină

Principiile generale de endocrinologie

Curba de titrare

Analiza Scatchard dată mai sus a folosit constanta de asociere, K, ca un descriptor al reacției de legare. După cum sa menționat mai sus, constanta de asociere are unitățile lui M -1. Constanta de disociere, Kd, este inversa constantei de asociere, cu unități de M. Pentru cazul unui singur set de site-uri care nu interacționează cu K identic, scriem:

curba de titrare este un complot de B împotriva log [L]. Este similar cu titrarea alcalină a acidului, în care cantitatea de alcalin puternic adăugat (NaOH) este reprezentată grafic în raport cu pH-ul. Curba este în formă de S. Panta sa maximă apare atunci când [L] = Kd. Pentru a vedea acest lucru, diferențiem Eqn (9.1.A1.17) în raport cu log [L]:

unde ν este fracția de saturație definită de Eqn (9.1.A1.7), al cărui interval este limitat la valori cuprinse între 0 și 1,0. Panta titrării curbei poate fi văzută din această relație ca fiind zero atunci când ν = 0 și când ν = 1,0 și să aibă un maxim când ν = 0,5. Panta maximă apare la un punct de inflexiune în curba în formă de S. Punctul de inflexiune la ν = 0,5 poate fi derivat prin setarea celei de-a doua derivate a lui B împotriva log [L] egală cu zero. Când ν = 0,5, din definiția lui ν, [L] = 1/K = Kd; acesta este punctul în care concentrația de ligand liber este egală cu constanta de disociere a siturilor. Un exemplu de curbă de titrare este prezentat în Figura 9.1.A1.2 .

Figura 9.1.A1.2. Curba de legare a titrării cu Bmax = 4 și Kd = 0,5.

Utilitatea curbei de titrare este că permite ca toate datele de legare să fie reprezentate într-un singur grafic și permite vizual judecarea unui punct important: datele de legare cuprind valori de B atât deasupra cât și sub 0,5 Bmax? Acesta este un control important al calității pentru a determina dacă datele de legare sunt la înălțimea sarcinii de a caracteriza Kd și Bmax. Cu excepția cazului în care punctul de inflexiune este bine definit, cum este posibil în curba de titrare să se prezică unde se va stabili legarea la Bmax? Atât Kd cât și Bmax sunt definite cel mai bine atunci când există date B, [L] luate mai sus și mai jos ν = 0,5. (Vezi I.M. Klotz, Numărul de site-uri de receptori din graficele Scatchard: fapte și fantezii. Știință 217: 1247–1249, 1982)