Acidul galic atenuează fibroza hepatică indusă de dimetilnitrosamină prin modificarea Smad

1 Institutul de TCM și produse naturale, Școala de științe farmaceutice, Universitatea Wuhan, Wuhan 430071, China

2 Laborator cheie MOE de biosinteză combinatorie și descoperire de medicamente, Universitatea Wuhan, Wuhan 430072, China

Abstract

Dimetilnitrosamina (DMN) este o hepatotoxină puternică, cancerigenă și mutagenă. În studiul nostru anterior, un acid galic candidat (GA) care există pe scară largă în alimente și fructe a fost selectat pentru capacitatea sa de a atenua toxicitatea DMN in vivo. Ne-am propus să investigăm potențialul terapeutic al GA împotriva fibrozei hepatice indusă de DMN. În primele patru săptămâni, DMN a fost administrat șobolanilor prin injecție intraperitoneală la fiecare două zile, cu excepția grupului de control. GA sau silimarina a fost administrată șobolanilor prin gavaj o dată pe zi, din a doua până la a șasea săptămână. GA a redus semnificativ afectarea ficatului în parametrii serici și a îmbunătățit capacitatea antioxidantă în țesuturile hepatice și renale. Citokinele implicate în fibroza hepatică au fost măsurate la niveluri transcripționale și translaționale. Aceste rezultate indică faptul că GA prezintă efecte antioxidante și antifibroze puternice și poate fi un medicament natural candidat eficient pentru tratamentul fibrozei hepatice.

1. Introducere

Într-un studiu anterior, am realizat că fracția de acetat de etil (EF) din fructul Terminalia bellirica are efect antifibrotic in vitro [12]. Analiza spectrometriei de masă arată că principalele componente ale EF sunt acidul galic (GA) și acidul elagic (date nepublicate). GA, un tip de acid fenolic cu efect antioxidant puternic, se găsește în dudul alb, roșu și negru, murul, zmeura, căpșuna, fructele dragonului, guava, mangostanul, papaya, frunzele de ceai și alte plante [13-15] . Deoarece GA este o componentă majoră a EF, presupunem că GA este un factor major al efectelor antifibrotice ale EF.

În acest studiu, ne propunem să dovedim că GA are capacitatea de a inversa fibroza hepatică utilizând un model animal de fibroză hepatică indusă de DMN și de a investiga biomarkerii modificați prin tratamentul GA după ce ficatul războiului suferă leziuni subcronice.

2. Materiale și metode

2.1. Produse chimice

Toți reactivii chimici și kiturile comerciale utilizate sunt menționați în tabelul suplimentar 1.

2.2. Animale

Un total de 48 de șobolani Sprague Dawley masculi (180-200 g) au fost achiziționați de la Centrul pentru animale de laborator al Universității Wuhan (Wuhan, China). Au fost adăpostiți într-un ciclu de lumină - întuneric de 12 ore la 25 ± 2 ° C și la o umiditate relativă de 50% -70%. Animalele au fost hrănite ad libitum cu o dietă standard de pelete și apă. Animalelor li s-a permis să se acomodeze cu condițiile de adăpostire timp de trei zile înainte de experimentare. Acest studiu a asigurat aprobarea de către Comitetul instituțional de îngrijire și utilizare a animalelor (IACUC) de la Centrul pentru Experimentarea Animalelor, Universitatea Wuhan, China.

2.3. Design de studiu

Șobolanii au fost împărțiți în șase grupe formate din opt animale pe grup și au fost supuși șase săptămâni de tratament. Proiectarea lucrării pe animale se referă la Su și colab. [16] și ușor modificat. Schema pentru inducerea DMN a fibrozei hepatice și pentru tratamentul GA se referă la Figura 1. Grupul I a fost administrat 0,9% soluție salină ca martor; Grupului II i s-a administrat 3 mg/kg și 7 mg/kg DMN dizolvat în soluție salină 0,9%; Grupul III a fost grupul de control pozitiv și a administrat silimarină, 100 mg/kg BW; Grupul IV a fost grupul cu doză mică GA administrat 25 mg/kg BW; Grupa V a fost grupul cu doză medie GA administrat 50 mg/kg BW; iar Grupul VI a fost grupul cu doză mare GA administrat 100 mg/kg BW.

2.4. Determinarea greutăților corpului și organelor

Greutățile corpului au fost înregistrate înainte ca șobolanii să fie sacrificați prin dislocarea coloanei vertebrale. După ce șobolanii au fost sacrificați, ficatul, rinichii și splina au fost extrase și cântărite imediat.

2.5. Determinarea biomarkerilor serici

La sfârșitul experimentului, toți șobolanii au fost postiti peste noapte și sacrificați a doua zi. Sângele a fost extras din inimă și coagulat. Serul a fost obținut prin centrifugare la 1000g timp de 10 min și depozitat la -20 ° C până la utilizare. Alanina aminotransferaza (ALT), aspartatul aminotransferaza (AST), fosfataza alcalină (ALP) și bilirubina totală (TB) au fost determinate de seturile comerciale conforme cu instrucțiunile producătorilor.

2.6. Evaluarea stresului oxidativ în ficat și rinichi

După ce ficatele și rinichii au fost extrase și cântărite, 10% omogenat de ficat sau țesut renal a fost preparat cu tampon fosfat de sodiu 50 mM (pH 7,4) și centrifugat la 5000 g timp de 10 minute la 4 ° C. Supernatanții au fost transferați în tuburi noi și depozitați la -80 ° C pentru experimentele ulterioare. Conținutul total de proteine a fost determinat folosind metoda Bradford. Activitățile de superoxid dismutază (SOD) și catalază (CAT) și nivelurile de glutation (GSH) și malondialdehidă (MDA) au fost determinate de kituri comerciale, urmând pașii indicați în manualele kitului.