Ablația Iah1, o genă candidată pentru ficatul gras indus de dietă, nu afectează lipidele hepatice
A contribuit în mod egal la această lucrare cu: Tomomi Masuya, Miyako Suzuki
Investigarea rolurilor, scrierea - schiță originală
Laboratorul de afiliere pentru nutriția animalelor, Departamentul de științe animale, Școala postuniversitară de științe bioagricole, Universitatea Nagoya, Nagoya, Japonia
A contribuit în mod egal la această lucrare cu: Tomomi Masuya, Miyako Suzuki
Roluri Arhivarea datelor, Investigații, Scriere - schiță originală
Laboratorul de afiliere pentru nutriția animalelor, Departamentul de științe animale, Școala postuniversitară de științe bioagricole, Universitatea Nagoya, Nagoya, Japonia
Investigarea rolurilor, resurse
Laboratorul de afiliere pentru nutriția animalelor, Departamentul de științe animale, Școala postuniversitară de științe bioagricole, Universitatea Nagoya, Nagoya, Japonia
Investigarea rolurilor, resurse
Laboratorul de afiliere pentru nutriția animalelor, Departamentul de științe animale, Școala postuniversitară de științe bioagricole, Universitatea Nagoya, Nagoya, Japonia
Divizia de afiliere a animalelor experimentale, Centrul pentru promovarea cercetării și educației medicale, Școala de absolvire a medicinei, Universitatea Nagoya, Nagoya, Japonia
Roluri Metodologie, Resurse
Divizia de afiliere a animalelor experimentale, Centrul pentru promovarea cercetării și educației medicale, Școala de Medicină absolută, Universitatea Nagoya, Nagoya, Japonia
Roluri Curarea datelor
Laboratorul de afiliere pentru nutriția animalelor, Departamentul de științe animale, Școala postuniversitară de științe bioagricole, Universitatea Nagoya, Nagoya, Japonia
Roluri de supraveghere, scriere - recenzie și editare
Laboratorul de afiliere pentru nutriția animalelor, Departamentul de științe animale, Școala postuniversitară de științe bioagricole, Universitatea Nagoya, Nagoya, Japonia
Roluri Achiziție finanțare, investigație, administrare de proiecte, validare, scriere - revizuire și editare
Laboratorul de afiliere pentru nutriția animalelor, Departamentul de științe animale, Școala postuniversitară de științe bioagricole, Universitatea Nagoya, Nagoya, Japonia
- Tomomi Masuya,
- Miyako Suzuki,
- Junko Tsujimura,
- Shinsaku Kanamori,
- Yuki Miyasaka,
- Tamio Ohno,
- Atsushi Murai,
- Fumihiko Horio,
- Misato Kobayashi
Cifre
Abstract
Citare: Masuya T, Suzuki M, Tsujimura J, Kanamori S, Miyasaka Y, Ohno T și colab. (2020) Ablația Iah1, o genă candidată pentru ficatul gras indus de dietă, nu afectează acumularea de lipide hepatice la șoareci. PLoS ONE 15 (5): e0233087. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0233087
Editor: Hervé Guillou, INRA, FRANȚA
Primit: 19 martie 2020; Admis: 28 aprilie 2020; Publicat: 14 mai 2020
Disponibilitatea datelor: Datele despre microarray au fost depozitate în NCBI Gene Expression Omnibus (GEO) (GSE14750).
Finanțarea: Această lucrare a fost susținută de un grant în ajutor pentru cercetare științifică (C) (nr. 25450166, 18K05532) de la Societatea japoneză pentru promovarea științelor (https://www.jsps.go.jp/), un grant de la Fundația Memorială Uehara (https://www.ueharazaidan.or.jp/), și o subvenție de la Japan Health Foundation (http://www.jnhf.or.jp/) (către MK). Finanțatorii nu au avut niciun rol în proiectarea studiului, colectarea și analiza datelor, decizia de publicare sau pregătirea manuscrisului.
Interese concurente: Nicio altă parte a acestei lucrări, în afară de rezumat, nu a fost publicată anterior sau nu este în curs de examinare pentru publicare în altă parte. Niciunul dintre autori nu are de declarat vreun conflict de interese.
Introducere
Boala hepatică grasă nealcoolică (NAFLD) se referă la o gamă largă de afecțiuni hepatice care apar fără consum excesiv de alcool, de la steatoză simplă la steatohepatită, fibroză și ciroză [1]. Incidența NAFLD a crescut la nivel mondial, împreună cu prevalența crescută a obezității, a diabetului de tip 2 și a dislipidemiei [2]. Steatoza hepatică este cauzată de aportul excesiv de energie și de lipsa exercițiilor fizice și apare atunci când echilibrul metabolismului lipidic în ficat este perturbat. Cu toate acestea, deoarece nu numai factorii de mediu, cum ar fi dieta și exercițiile fizice, ci și factorii genetici, afectează dezvoltarea NAFLD, patogeneza acestei boli nu a fost pe deplin înțeleasă.
În acest studiu, pentru a investiga relația dintre Iah1 și acumularea de lipide hepatice, am produs șoareci Iah1 knockout (KO) cu fundal C57BL/6N și A/J-12 SM. De asemenea, am efectuat analize de microarray de ADN folosind țesutul adipos epididimal al șoarecilor A/J-12 SM (WT_A12) și A/J-12 SM Iah1-KO (KO_A12) pentru a investiga efectul deficitului de Iah1 asupra metabolismului lipidic.
Materiale și metode
Animale
Toți șoarecii au fost menținuți la 23 ± 2 ° C cu un ciclu de lumină/întuneric de 12 ore (lumina aprinsă de la 8:00 la 20:00) și acces ad libitum la alimente și apă în condiții convenționale, în facilitățile de la Școala Absolventă de Științe Bioagricole, Universitatea Nagoya. Șoarecii au fost înțărcați la vârsta de 3 săptămâni și au fost găzduiți cuști individuale la vârsta de 5 săptămâni.
Dieta și programul experimental
Șoarecii masculi Iah1-wild (WT_B6 sau WT_A12) și -KO (KO_B6 sau KO_A12) au fost hrăniți cu un chow standard, CE-2 (CLEA Japan, Inc., Japonia), până la vârsta de 6 săptămâni. Ulterior, toți șoarecii au fost hrăniți cu o dietă bogată în grăsimi (D07053003; Research Diets, New Brunswick, NJ, SUA) cu vârsta cuprinsă între 6 și 18 săptămâni (timp de 12 săptămâni). Compoziția dietei bogate în grăsimi a fost descrisă anterior [7]. Pe scurt, dieta bogată în grăsimi utilizată include untură de porc (30% g/g) și cazeină (20,9% g/g). Greutatea corporală a fost măsurată în fiecare săptămână în timpul perioadei experimentale (6-18 săptămâni). La vârsta de 18 săptămâni, probele de sânge au fost colectate din venele orbitale după un post de 4 ore (9:00 - 13:00). Apoi, șoarecii au fost sacrificați prin dislocare cervicală. Țesuturile (ficat, rinichi, plămâni, țesut adipos maro, grăsime epididimală, grăsime subcutanată, grăsime mezenterică și grăsime retroperitoneală) au fost colectate, cântărite și congelate imediat folosind azot lichid.
Acest studiu a fost realizat în conformitate cu Regulamentul privind experimentele pe animale de la Universitatea Nagoya. Toate procedurile și îngrijirea animalelor au fost aprobate de Comitetul de experimentare a animalelor, Școala Absolventă de Științe Bioagricole, Universitatea Nagoya (aprobare nr. 201622604, 2017030219, 2018031316).
Analiza secvenței ADN
Gena Iah1 și genele candidate în afara țintei de șoareci KO_A12 au fost amplificate prin PCR și produsele PCR au fost purificate folosind kitul ExoSAP-IT (Affymetrix). Primerii utilizați pentru analiza secvenței efectelor în afara țintei sunt prezentați în tabelul S2. Produsele PCR purificate au fost marcate folosind trusa de secvențiere a ciclului BigDye Terminator v3.1 și ADN-ul marcat a fost purificat prin precipitare cu etanol. Precipitatul a fost apoi dizolvat în Hi-Di Formamidă (Applied Biosystems). Secvențele de ADN au fost determinate utilizând Analizorul genetic aplicat Biosystem 3130/3130xl (Applied Biosystems).