Virusul Distemper Canin este o boală emergentă la tigrii Amur pe cale de dispariție sălbatică (Panthera tigris altaica

ABSTRACT

IMPORTANŢĂ Recunoașterea apariției bolilor la animale sălbatice este un eveniment rar. Aici, pentru prima dată, identificăm și caracterizăm un virus al tulburării canine (CDV), a doua cauză cea mai frecventă de deces al bolilor infecțioase la câinii domestici și o boală virală de importanță globală în carnivorele comune și pe cale de dispariție, ca etiologie a bolii neurologice. și encefalită fatală la tigrii Amur sălbatici, pe cale de dispariție. Am stabilit că în 2010 CDV a fost ucis direct sau indirect

distemper

1% din tigrii Amur. Localizarea cazurilor pozitive într-o zonă geografică extinsă sugerează că CDV este larg distribuit în gama tigru. Interacțiunile între specii sunt în creștere pe măsură ce populațiile umane cresc și se extind în habitate sălbatice. Identificarea rezervoarelor de animale pentru CDV și identificarea tulpinilor CDV care sunt transmisibile către și printre speciile faunei sălbatice, inclusiv tigrii Amur și leopardii Amur simpatrici în pericol critic (Panthera pardus orientalis), este esențială pentru ghidarea eforturilor de conservare și atenuare.

Observare

Țesuturile colectate în timpul procedurilor de necropsie de la cinci tigri adulți, liberi, care au murit în mod natural sau au fost distruse în RFE în 2001, 2004 sau 2010 au fost disponibile pentru histopatologie, colorare IHC, hibridizare in situ (ISH) și transcripție inversă-PCR ( Testarea RT-PCR). Țesutul cerebral, critic în evaluarea infecției cu CDV, a fost disponibil de la doi tigri (Pt2004 și Pt2010-3); plămânul, un sit principal al replicării CDV, a fost disponibil de la toți tigrii.

Prelucrarea histologică a țesuturilor fixate în formalină a fost efectuată folosind metode de rutină. Cinci până la optsprezece din douăzeci și două de tipuri de țesuturi diferite (țesut adipos, glandă suprarenală, arteră, creier, inimă, rinichi, intestin gros, ficat, plămân, ganglion limfatic, ovar, pancreas, nerv periferic, glandă salivară, mușchi scheletic, splină, stomac, intestin subțire, testicul, limbă, trahee sau vezică urinară) au fost disponibile de la fiecare animal pentru examinare histologică. Microscopia cu câmp luminos a fost efectuată folosind un microscop Leica DM2500 (Leica Microsystems Wetzlar GmbH, Wetzlar, Germania).

IHC pentru antigenul virusului tulburător canin a fost efectuat utilizând un anticorp monoclonal primar anti-CDV IgG1 monoclonal de suprafață, așa cum s-a descris anterior și a inclus martori pozitivi și negativi (5). Microscopia cu câmp luminos a fost efectuată așa cum s-a descris mai sus.

Pentru ISH, sondele pentru o regiune nucleotidică de 600 bp a genei fosfoproteinei (P) a virusului distemperului canin au fost proiectate de Panomics (Affymetrix, Inc., Santa Clara, CA). Această regiune corespunde nucleotidelor 1926-2526 ale genomului CDV (acces GenBank nr. AF378705). ISH folosind colorarea Fast Red a fost efectuată folosind kitul Panomics QuantiGene View RNA pentru secțiuni încorporate în parafină fixate în formalină conform protocolului producătorului (produsul QV0050, QuantiGene ViewRNA FFPE; Affymetrix, Inc., Santa Clara, CA,) și așa cum a fost descris anterior (7). Secțiunile au fost contracolorate cu hematoxilină. Secțiunile duplicate au fost rulate fără sondă ca un control negativ. Microscopia cu câmp luminos a fost efectuată așa cum s-a descris mai sus.

Pentru a determina relațiile filogenetice ale CDV-urilor tigru între ele și cu alți virusuri și morbillivirusuri CDV, s-au aliniat secvențe de nucleotide pentru genele P și H de la tigri și tulpini CDV reprezentative (GenBank, Centrul Național pentru Informații despre Biotehnologie; http: // www .ncbi.nlm.nih.gov) (software Geneious Pro 5.1.7; Biomatters Ltd., Auckland, Noua Zeelandă). Identitățile perechi au fost obținute prin analiza PAUP pentru a crea o matrice de comparație în perechi la distanță P (plugin PAUP în Geneious Pro). Analiza bayesiană a fost efectuată utilizând pluginul MrBayes 3.1 în Geneious Pro folosind variația ratei distribuite gamma și un model de substituție HKY85 (8). Primii 25% dintr-o lungime a lanțului de 1.100.000 au fost aruncați ca arsuri și 4 lanțuri încălzite au fost rulate cu o frecvență de sub-eșantionare de 200. Virusul Rinderpest (nr. De acces AF132934) a fost folosit ca un grup excesiv. Copacii au fost finalizați și etichetați (software FigTree v1.3.1 [Andrew Rambaut, Institutul de Biologie Evolutivă, Universitatea din Edinburgh, 2006 - 2009; http://tree.bio.ed.ac.uk/]). Au fost calculate valorile probabilității posterioare.

Între ianuarie și iunie 2010, trei tigri Amur adulți (Panthera tigris altaica) (Pt2010-1, Pt2010-2 și Pt2010-3) au intrat în sate din RFE (Fig. 1A și B). Fiecare a fost ucis (Pt2010-1 și Pt2010-3) sau a murit în mod natural (Pt-2010-2) după ce a prezentat un comportament neurologic anormal (dezorientare, lipsă de răspuns la stimulare și/sau neînfricare neagresivă). Înainte de 2010, alți doi tigri Amur liberi (Pt2001 și Pt2004) au fost capturați și au murit după ce au prezentat un comportament neurologic similar (Fig. 1A și B). Patru din cei cinci tigri au fost slăbiți sau au prezentat o pierdere extremă în greutate în momentul decesului (Fig. 1B).

Distribuția geografică (A) și informațiile istorice (B) pentru tigrii din Extremul Orient rus care au murit sau au fost uciși din cauza comportamentului neurologic anormal în 2001, 2004 sau 2010. (C) Tiger Pt2010-3: hematoxilină-și-eozină- secțiunea colorată a creierului cu incluziuni virale eozinofile intranucleare neuronale (săgeată). (D) Tiger Pt2010-3: colorare imunohistochimică pozitivă a neuronilor cu anticorp primar monoclonal IgG la antigenul proteinei învelișului viral CDV (săgeți) (colorare rapidă roșie). (E și F) Hibridizare pozitivă in situ (roșu rapid) a sondelor la secvența genei CDV P în neuronii infectați cu CDV în tigru Pt2004 (E) și tigru Pt2010-3 (F). Bară = 50 µm în toate imaginile.