Timpii de contact mai lungi măresc contaminarea încrucișată a enterobacterelor aerogene de la suprafețe la alimente
Date asociate
ABSTRACT
Această cercetare a încercat să cuantifice contaminarea încrucișată între o varietate de alimente și suprafețele comune de bucătărie, în timp ce variază timpul de contact și matricea bacteriană și să o facă într-o manieră extinsă și cuprinzătoare. Rezultatele descrise aici avansează înțelegerea noastră asupra contaminării încrucișate și a factorilor care o influențează. Această cercetare informează cultura populară și îmbunătățește înțelegerea noastră științifică a contaminării încrucișate și a factorilor care o influențează.
MATERIALE ȘI METODE
Tulpina bacteriană și prepararea culturii.
Pentru toate experimentele a fost utilizat un microorganism nonpatogen, de calitate alimentară, Enterobacter aerogenes B199A, cu caracteristici de atașament similare cu cele ale Salmonella (Vivolac Cultures, Indianapolis, IN) (14). Tulpina E. aerogenes utilizată aici este rezistentă la acidul nalidixic, ceea ce permite să fie enumerat în prezența altor microorganisme pe probe alimentare sau suprafețe. Experimentele de control (făcute prin eșantionare și placare pe agar de soia triptic [Difco, BD, Sparks, MD] cu 50 μg/ml acid nalidixic [Sigma Chemical Co., St. Louis, MO] [TSA-na]) au arătat că acidul nalidixic -celulele E. aerogenes rezistente nu erau prezente inițial pe niciunul dintre alimente sau suprafețe la niveluri de> 2 log CFU/suprafață sau alimente.
Culturile au fost pregătite pe baza muncii anterioare efectuate în laboratorul nostru (13) și de către alții (14). Un stoc înghețat de E. aerogenes în 80% glicerol steril a fost striat pe TSA-na. O colonie din fiecare placă a fost transferată la 10 ml de bulion triptic de soia (Bacto, BD, Sparks, MD) cu 50 ng/ml acid nalidixic (TSB) și incubat la 37 ° C timp de 24 de ore. Matricile de inoculare au fost de două tipuri, una folosind celule recoltate prin centrifugare la 5.000 × g timp de 10 minute și spălate de două ori în 10 ml de peptonă 0,1% (Difco, BD) și una folosind celule prelevate direct dintr-o cultură TSB inoculată peste noapte. O concentrație finală de ~ 108 UFC/ml a fost verificată prin enumerare pe TSA.
Pregătirea suprafețelor domestice.
Au fost utilizate patru suprafețe diferite tipice celor găsite în mediile domestice: oțel inoxidabil (tip 304, 0,018-in. Grosime, calibru 16; OnlineMetals, Seattle, WA), plăci ceramice vitrate (Brancacci Windrift Beige; Daltile, Dallas, TX), lemn laminat de arțar (arțar nordic; Mohawk, Calhoun, GA) și covor interior-exterior (Morella; Foss Manufacturing, Hampton, NH). Au fost comandate online sau achiziționate de la un magazin local de îmbunătățire a locuințelor. Materialele de suprafață au fost tăiate în cupoane (5 x 5 cm). Cupoanele din oțel inoxidabil și plăci ceramice au fost dezinfectate înainte de inoculare prin înmuiere în etanol 70% timp de 1 oră, îndepărtate, uscate la aer și autoclavizate. Dezinfectarea cupoanelor pentru lemn și covor a provocat modificări structurale, astfel încât acestea au fost aruncate după autoclavare după o singură utilizare.
Tipuri de alimente.
Patru alimente (pepene verde, pâine albă [ShopRite, Wakefern Food Corp., Elizabeth, NJ], unt nesărat [ShopRite, Wakefern Food Corp., Elizabeth, NJ] și bomboane gumate [Căpșuni Haribo]) au fost cumpărate online sau de la un local supermarket. Pepenele întreg a fost depozitat la 4 ° C înainte de utilizare. Pepenele verde (numai carne) și pâinea (cu excepția crustei) au fost tăiate în bucăți (aproximativ 4 x 4 cm). Untul fără sare a fost adus la temperatura ambiantă (± 24 ° C) înainte de a fi întins pe pâine. Toate alimentele aveau zone de contact echivalente (~ 16 cm 2). PH-ul și activitatea apei (aW) a probelor au fost măsurate în triplicat cu o sondă de pH de suprafață (pH-metru Accumet Basic AB15; Fisher Scientific) și un metru aW (Rotronic Instrument Corp., Hauppauge, NY), respectiv.
Transferul între alimente și suprafețe.
Scenariile de transfer au fost evaluate pentru fiecare tip de suprafață de contact (4), fiecare tip de aliment (4), patru timpi de contact și două matrice de inocul, totalizând 128 de scenarii. Fiecare scenariu a fost reprodus de 20 de ori, totalizând 2.560 de măsurători. Fiecare tip de suprafață de contact a fost inoculat la fața locului cu 1 ml de inocul prin utilizarea a 8 până la 10 picături răspândite pe suprafața de 5 x 5 cm. Suprafețele au fost așezate într-un dulap pentru biosecuritate (SterilGARD Hood; The Baker Company, Inc., Sanford, ME) timp de 5 ore, după care suprafețele au fost vizibil uscate. Înainte de 5 h, suprafețele erau încă umede și uneori mai mari de 5 h, diferența de rată de recuperare între matricile de inocul a crescut. Atât matricele tampon peptonice, cât și matricile de inocul TSB-na au dat o concentrație aproximativă de 10 7 CFU/suprafață după uscare. Alimentele au fost aruncate pe suprafețele respective folosind mâini înmănușate de la o înălțime de 12,5 cm și lăsate să se odihnească de patru ori diferite (colonii de E. aerogenes. Plăcile au fost incubate la 37 ° C timp de 24 de ore. Au fost numărate coloniile și nivelurile populației au fost numărate exprimat în număr de CFU per aliment sau probă de suprafață.
Analiza datelor.
Procentul de transfer a fost calculat după cum urmează: [hrană totală CFU/(hrană totală CFU + suprafață totală CFU)] × 100. Procentele de transfer de la suprafață la alimente au fost transformate în jurnal cu Microsoft Excel (Microsoft, Redmond, WA) și SigmaPlot (Systat ) Software Inc., San Jose, CA), deoarece cercetările anterioare au arătat că ratele de transfer netransformate sunt foarte înclinate și ratele de transfer transformate în jurnal sunt aproximativ distribuite în mod normal (13, 31). Atunci când alimentele au conținut mai mic decât limita de detectare (2 log CFU), ratele de transfer au fost calculate ca și cum concentrația pe alimente ar fi la limita de detectare. Variabilele și interacțiunile dintre variabile au fost considerate semnificative la o valoare P din tabelul 1. Pepenele verde a avut cea mai mare cantitate de alimente studiate. Pâinea și untul măsuraseră o valoare apropiată de cea a pepenelui. AW al bomboanelor gumante a fost considerabil mai mic decât cel al celorlalte alimente măsurate (0,72 față de ≥0,95). Untul a avut cel mai mare pH (6,25) dintre oricare dintre alimentele măsurate, iar bomboanele gumate au avut cel mai mic (2,80). Deși un pH scăzut este cunoscut pentru a provoca leziuni de stres la microorganisme, este puțin probabil, dat fiind timpul scurt de contact din acest studiu, că acest lucru s-ar fi produs în experimentele cu bomboane gumate (32). Valorile măsurate ale pH-ului pâinii și pepenelui au fost intermediare (5,80 și respectiv 5,43).