Segregarea regiunii HLATNF este legată de spectrul clinic al leprei la familiile care prezintă mixte
Abstract
În fiecare an, aproximativ 600.000 de cazuri noi de lepră sunt diagnosticate în întreaga lume. Spectrul bolii variază foarte mult de la forme limitate de tuberculoizi la forme lepromatoase extinse. O măsură a riscului de a dezvolta forme de lepromă este oferită de gradul de reactivitate a pielii la lepromină (reacția Mitsuda). Pentru a aborda un control oligogen postulat al patogenezei leprelor, am studiat în prezentul studiu legătura susceptibilității leprelor, a subtipurilor clinice de lepră și a extinderii reacției Mitsuda la șase regiuni cromozomiale care poartă loci cunoscuți sau suspectați de sensibilitate la lepră. Singurul rezultat semnificativ obținut a fost legarea subtipului clinic de lepră cu regiunea HLA/TNF pe cromozomul uman 6p21 (Pcorectat = 0,00126). În plus, am stabilit că în cadrul aceleiași familii diferite haplotipuri HLA/TNF se separă în pacienți cu subtipuri de lepră diferite, demonstrând în mod direct importanța acestei regiuni a genomului pentru controlul prezentării clinice a leprei.
Introducere
Lepra este o boală infecțioasă cronică în principal a pielii și a nervilor cauzată de agentul patogen intracelular cu creștere lentă Mycobacterium leprae. 1 Boala afectează în prezent aproximativ 1,4 milioane de persoane, majoritatea pacienților găsiți în India și Brazilia. 2 În clasificarea clasică Ridley - Jopling, 3 cazuri de tuberculoid (TT) și lepromatoasă (LL) ocupă capetele opuse ale unui spectru continuu de manifestări ale bolii. Cazurile TT arată implicarea a puține leziuni cutanate bine definite, cu bacili rari în piele și nervi și prezența unui anti puternic-M. leprae imunitatea mediată de celule. Cazurile LL prezintă leziuni extinse ale pielii, prezența a numeroși bacili în piele și nervi și anergie la M. leprae antigen. Un test clinic pentru a măsura calitatea anti-M. leprae răspunsurile imune sunt așa-numita reacție „Mitsuda” la căldură injectată intradermic M. leprae bacili (lepromin). Un răspuns pozitiv indică un risc scăzut de dezvoltare a leprei lepromatoase, în timp ce lipsa de reacție a leprominei se găsește la persoanele cu risc crescut de a dezvolta forma lepromatoasă de lepră 4 .
Obiectivul prezentului nostru studiu a fost de a descifra în continuare sistemul genetic implicat în controlul patogeniei leprei. În special, am fost interesați de identificarea genelor de susceptibilitate care ar acționa paralel cu NRAMP1 genă la populația vietnameză care demonstrează în mod direct caracterul oligogen al susceptibilității la lepră. Am abordat problema testând șase regiuni cromozomiale, cunoscute sau sugerate să poarte loci de susceptibilitate la lepră, pentru legătura cu trei fenotipuri de lepră diferite (adică lepră) în sine, subtip lepros și întinderea reactivității Mitsuda) într-un grup de 20 de familii de lepră multiplex. Mai exact, am testat pentru o posibilă contribuție la susceptibilitatea leprosului a regiunii cromozomiale 10p13 sugerată să poarte o genă de susceptibilitate la lepră printr-o scanare recentă, 13 regiunea cromozomului 17 adăpostind VDR gena, 14 the HLA/TNF regiune pe cromozomul 6, 18, precum și receptorul factorului de necroză tumorală 1 și receptorul 2 (TNFR1 și TNFR2) regiunile de pe cromozomul 12 și respectiv cromozomul 1 și regiunea clusterului de citokine de pe cromozomul 5q.
Rezultate
Cele 20 de familii nucleare incluse în studiu au cuprins 118 frați (59 cu lepra și 59 sănătoși) cu fenotipuri disponibile și date moleculare. Distribuția numărului de familii în funcție de subtipurile clinice ale copiilor afectați este afișată în Tabelul 1. Marea majoritate a pacienților prezentați ca cazuri de tuberculoid (TT: 35%) sau lepromatoase (LL: 28%) reprezentând cele două capete opuse în spectrul subtipurilor clinice de lepră (Figura 1a). Amploarea reacției Mitsuda a fost cunoscută pentru toți frații și a fost utilizată pentru a testa loci suplimentari implicați posibil în controlul genetic al reacției leprominului. Distribuția reacției Mitsuda codificată ca fenotip cantitativ este prezentată în Figura 1b. Distribuția corespunzătoare atunci când se utilizează o definiție categorică ordonată în patru clase a fost 22, 41, 38 și 17 pentru prima clasă (⩾ 10 mm), respectiv.
Distribuția fenotipurilor clinice între descendenții celor 20 de familii studiate. (A) distribuția subtipurilor de lepră între 59 de descendenți afectați de lepră (TT = tuberculoid, BT = tuberculoid limită, BB = limită, BL = lepromatos limită, LL = lepromatos, I = nedeterminat). (b) Distribuția reacțiilor Mitsuda observate între 118 descendenți (59 de cazuri de lepră; 59 de frați sănătoși).
Exemplu de segregare a HLA/TNF haplotipuri în rândul a două familii de lepră. TNFp desemnează TNF (-308) G/A promotor polimorfism; TNFa și TNFb sunt doi markeri microsateliți localizați în vecinătatea TNF genă. Denumirile familiale sunt date în partea stângă sus a fiecărui pedigree și starea bolii subiectului (goală, neafectată; TT, tuberculoid; LL, lepromatoasă; BB, borderline) este dată în fiecare simbol genealogic. Denumirile de alele date sunt atribuite în mod arbitrar numere de alele care se separă în familii.
Discuţie
Trei fenotipuri care reflectă diferite aspecte ale patogenezei leprei au fost alese pentru analiza genetică: lepra în sine, tipul de lepră și amploarea reactivității pielii Mitsuda numită și reactivitatea leprominei. Ultimul fenotip este de interes, deoarece reactivitatea leprominului a fost legată de riscul de a dezvolta forma LL a bolii și de a prezenta reacții de inversare de tip I. 20 Reacțiile de hipersensibilitate de inversare de tip I sunt, la rândul lor, o cauză majoră a afectării funcției nervoase a leprei. 1 Legătura acestor trei fenotipuri de susceptibilitate cu șase regiuni cromozomiale a fost testată în 20 de familii de lepră multiplex. În aceleași familii, am detectat anterior un efect genetic al NRAMP1 regiunea cromozomială pe regiunea cromozomială 2q35 pe susceptibilitatea la lepră 9 și amploarea testului Mitsuda. 4
Niciuna dintre regiunile candidate nu a prezentat dovezi semnificative pentru legătura cu reacția imună, măsurată prin testul cutanat cu lepromin. Mai ales neașteptată a fost lipsa legăturii cu HLA/TNF regiune deoarece se crede pe scară largă că HLA alelele sunt elemente majore de control genetic ale imunității anti-micobacteriene. În schimb, am detectat anterior un impact puternic al NRAMP1 regiune cromozomială pe același răspuns imun. 4 Exemplul controlului genetic al reactivității leprominului arată în mod clar că mecanismele genetice majore de declanșare a răspunsurilor imune anti-micobacteriene pot fi localizate în afara HLA/TNF complex așa cum a sugerat anterior alte studii. 21