Omogenizare - o prezentare generală Subiecte ScienceDirect

Omogenizările pot fi produse prin stoarcerea și frecarea țesutului într-o pungă de plastic sau prin utilizarea unui blender peristaltic.

Termeni asociați:

• Anticorpi
• Enzimă
• Proteină
• ADN
• LD50
• Supernatant
• Ion calciu

Descărcați în format PDF

Despre această pagină

Sisteme de comportament hormonal non-mamifer

Gregory F. Ball, Jacques Balthazart, în Hormoni, creier și comportament (ediția a treia), 2017

2.11.6.4.1 Studii in vitro

Activitatea aromatazică în omogenatele preoptice de prepeliță s-a dovedit a fi rapid inhibată de condițiile de fosforilare (creșteri în intervalul fiziologic al concentrațiilor de ATP, Mg 2+ și Ca 2+) și acest proces a fost blocat în prezența diferiților inhibitori ai protein kinazei. Această inhibiție a fost abolită în prezența 1 mM EGTA, care chelează Ca 2+ liber prezent în omogenate (Balthazart și colab., 2001a, 2003).

Analizele genei aromatazei într-o varietate de specii de mamifere și aviare, inclusiv prepelița, au demonstrat că mai multe situri consensuale de fosforilare (tirozină și serină/treonină reziduuri) sunt prezente în aceste secvențe de aromatază (a se vedea detaliile în Balthazart și colab., 2003; Charlier și colab. ., 2011a). Studii suplimentare au demonstrat că aceste procese de fosforilare reglează, de asemenea, activitatea enzimatică a aromatazei în ovarul prepelițelor și a aromatazei umane transfectate în diferite linii celulare și că activitatea scăzută a fost asociată cu o fosforilare crescută a proteinei aromatazei. Încercările de a identifica prin mutageneză direcționată către situs reziduurile specifice de aminoacizi a căror fosforilare mediază modificări ale activității enzimatice nu au avut totuși succes (Charlier și colab., 2011a).

Studiile cu explante in vitro ale hipotalamusului POA au demonstrat în continuare că inhibițiile rapide (în decurs de 5 minute) ale aromatazei probabil (deși nu sunt demonstrate formal) mediate de fosforilările dependente de Ca 2+ au loc și în neuronii intacti. Aceste inhibiții pot fi declanșate de depolarizări induse de K +, expunerea la thapsigargin, o lactonă cunoscută pentru capacitatea sa de a mobiliza bazine intracelulare de Ca 2+ sau expunerea la agoniști ai receptorilor glutamat (AMPA (acid amino-metil-4-isoxazol propionic) ), kainat și într-o măsură mai mică NMDA (acid N-metil-d-aspartic)) și sunt complet reversibile (Balthazart și colab., 2001a, 2006). Activitatea aromatazei umane transfectate în linii celulare inițial negative a fost în mod similar scăzută printr-o depolarizare indusă de K + și complet restabilită în timpul perioadei de spălare. În mod interesant, studiile Western blot au demonstrat că activitatea enzimatică scăzută în condiții de depolarizare nu corespunde cu o scădere a concentrației proteinei enzimatice indusă de exemplu de degradare (Charlier și colab., 2011a).

CONSERVATOARE Analiză

Alți conservanți

Bifenil

Distilarea cu abur a omogenatului de coajă de citrice și extracția distilatului cu heptan oferă o probă care poate fi analizată pentru bifenil prin TLC pe silicagel cu heptan ca solvent în curs de dezvoltare. Analiza cantitativă se realizează prin extragerea bifenilului din mediul TLC cu etanol și măsurarea absorbanței soluțiilor rezultate la 248 și 300 nm. Absorbanta la 300 nm este folosita pentru corectarea absorbantei de fond. Sunt disponibile și metode de analiză GLC.

Tiabendazol

Tiabendazolul poate fi extras din alimente cu acid (HCI), în care este redus ulterior cu zinc în glicerol 30% + fenilendiamină. Oxidarea ulterioară cu ioni ferici dă naștere unui complex albastru, care este extras în butanol pentru măsurarea spectrofotometrică.

Acid lactic

Metodele standard pentru determinarea acidului lactic implică conversia acestuia în complexul Fe (III) pentru măsurarea spectrofotometrică sau prin GLC după metilare completă. Într-o procedură enzimatică, acidul lactic este transformat în piruvat de NAD + (lactat dehidrogenază); produsul este prins prin reacția cu glutamat (glutamat - piruvat transaminază) pentru a deplasa echilibrul acid lactic - piruvat spre dreapta. Rata de utilizare a NAD + este utilizată pentru a măsura concentrația de acid lactic. Pregătirea probei este în general așa cum este descris pentru acizii carboxilici de mai sus.

Apă oxigenată

Testele la fața locului pentru prezența peroxidului de hidrogen în lapte utilizează fie o soluție de pentoxid de vanadiu în H2SO4 (culoare roz sau roșu), fie KI/amidon (culoare albastră).

Analiza cantitativă se face cu peroxidază și un substrat adecvat. O-dianisidina frecvent recomandată este cancerigenă și sunt preferate substraturi precum guaiacol sau 2,2'-azinobis (acid 3-etilbenztiazolidină-6-sulfonic). Testele pe probe de lapte se efectuează după precipitarea proteinei prin ajustarea la pH 4,5 cu HCI.

Nisin

Complexitatea procedurilor pentru izolarea și cuantificarea chimică a nisinei a condus la dezvoltarea testelor microbiologice ca proceduri normale de analiză. O unitate internațională de activitate a nisinei este gradul de inhibare a unui microorganism testat cauzat de aproximativ 25 ng de nisină pură. Un microorganism de testare adecvat este Streptococcus agalactiae. O procedură specială de testare este o adaptare a testului de reducere a albastrului de metilen; întârzierea decolorării colorantului este proporțională cu concentrația de nisină într-un interval de concentrație de 10 ori. O nouă metodă de analiză implică testul imunosorbent legat de enzime, care este mult mai simplu decât testul microbiologic și ar trebui să devină popular.

Toxicologie renală

KG. Dickman, A.P. Grollman, în Comprehensive Toxicology, 2010

7.18.4.2.4 Toxicocinetica

Spre deosebire de prezența sa variabilă în urină și sânge, orellanina este detectată frecvent în probele de biopsie renală, unde toxina poate fi reținută într-o formă solubilă timp de 6 luni post-digestie (Andary și colab. 1989; Franz și colab. 1996; Holzl și colab. 1997; Rohrmoser și colab. 1997). Orellina, metabolitul di-reducere, a fost de asemenea găsit în biopsiile renale în cazurile de otrăvire cu orellanină și probabil că provine fie din ciuperca însăși, fie din metabolismul extra- sau intrarenal al orellaninei. Prezența continuă a orellaninei în cortexul renal după hemodializă și prezența sa persistentă în acest țesut timp de câteva luni, în absența orellaninei detectabile în urină sau sânge, sugerează că toxina este sechestrată în rinichi într-o formă slab schimbabilă. Au fost făcute observații similare in vitro în care doar 25% din orellanină adăugată la omogenizarea rinichilor ar putea fi recuperată, comparativ cu recuperarea completă atunci când a fost adăugată la ser (Holmdahl și colab. 1987).

---