Efectul mediului metabolic în etapele cheie ale dezvoltării foliculilor la bovine se concentrează asupra

Școala de Agricultură și Știința Alimentelor,

Școala de Medicină Veterinară,

Școala de Medicină și Științe Medicale, University College Dublin, Belfield, Dublin;

Școala de Medicină Veterinară,

Școala de Agricultură și Știința Alimentelor,

Centrul de cercetare și inovare pentru animale și pășuni, Teagasc, Athenry, Co. Galway, Irlanda; și

Școala de Medicină Veterinară, Universitatea din Glasgow, Glasgow, Regatul Unit

Școala de Agricultură și Știința Alimentelor,

Adresa pentru solicitări de reimprimare și alte corespondențe: A.C.O. Evans, UCD Agriculture and Food Science Center, Belfield, Dublin 4, Irlanda. (e-mail: [e-mail protejat]).

Abstract

mediul metabolic al femeilor poate fi afectat atât de factorii de stres cronici, cât și de cei acută în momentele critice ale ciclului reproducerii și poate fi dăunător funcției reproductive (7, 17). De exemplu, la animalele de carne de vită, restricția dietetică acută a redus concentrațiile sistemice de hormoni metabolici (insulină, IGF-I) și a dus la creșterea numărului de foliculi nonovulatori; în plus, foliculii care au ovulat au avut o rată de creștere redusă, diametrul maxim și secreția de estradiol (8, 9, 52, 53). Această situație este similară cu adaptările metabolice observate la lactație la începutul perioadei postpartum la vaca de lapte care alăptează, atunci când prezintă profiluri metabolice similare și au funcție foliculară preovulatorie redusă, adică, estradiol sistemic redus, în ciuda creșterii diametrului foliculului ovulator (68). Manipularea dietetică pentru a depăși acești factori de stres metabolici prin creșterea nutrițională a insulinei circulante a scurtat intervalul de la fătare la prima ovulație (32) și a crescut numărul de foliculi mici (300 au fost, de asemenea, îndepărtați.

ANOVA

Analiza căii de ingeniozitate

qRT-PCR

Tabelul 1. Numărul de acces, simbolul genei și numele utilizate pentru a genera secvențe exemplare înainte și inversă pentru analiza qRT-PCR

Toți primerii au fost utilizați la o concentrație finală de 300 nM.

Analiza celei mai adecvate normalizări qRT-PCR pentru celulele theca și granuloase a fost efectuată folosind aplicația geNorm din software-ul Biogazelle qBase plus (http://www.qbaseplus.com; Biogazelle, Ghent, Belgia) (35). În experimentul 1, factorul optim de normalizare a fost calculat ca medie geometrică a DDX39B și UBIQ pentru celulele theca, în timp ce media geometrică a DAD1 și UBIQ a fost recomandat pentru celulele granuloase. Pentru probe în experimentul 2, factorul optim de normalizare a fost calculat ca medie geometrică a DDX39B și ACTB pentru celulele theca, în timp ce media geometrică a DAD1 și UBIQ a fost recomandat pentru celulele granuloase. Toate datele de expresie pentru genele de interes au fost calibrate normalizate, iar valorile de expresie pentru fiecare genă au fost determinate în unități arbitrare.

Analiza statistică a măsurătorilor fiziologice și qRT-PCR

Probele de ser, plasmă și fluid folicular și rezultatele qRT-PCR au fost analizate folosind sisteme de analiză statistică (Institutul SAS, Cary, NC). Normalitatea și omogenitatea varianței datelor au fost determinate folosind histograme, qqplots și procedura UNIVARIATE în SAS. Când a fost detectată eterogenitatea varianței, datele au fost transformate prin ridicarea variabilei la puterea lambda, determinată de analiza transformării Box-Cox utilizând procedura TRANSREG în SAS. Testele de ipoteză ( valori) au fost efectuate acolo unde este cazul pe date transformate și netransformate. Mediile celor mai mici pătrate și erorile standard reflectă analiza datelor netransformate.

În experimentul 1, efectul stadiului de dezvoltare a foliculului, starea animalului (vaca/junincă) și interacțiunea acestora asupra analiților serici, lichidului folicular și expresia genei relative au fost determinate folosind metodologia modelului mixt (PROC MIXED) în SAS. În experimentul 2, efectul tratamentului (1,2 M vs. 0,4 M) asupra analiților plasmatici, fluidului folicular și expresia genei relative a fost determinat utilizând procedura PROC GLM în SAS. Toate datele privind expresia genelor pentru genele de interes sunt prezentate ca medii ± SE ale valorilor de expresie calibrate, normalizate, relative în unități arbitrare. Coeficienții de corelație Pearson dintre analiții de sânge și valorile expresiei genelor au fost determinați utilizând PROC CORR al SAS. Coeficienții de corelație au fost clasificați ca fiind puternici (r> 0,6), moderate (r între 0,4 și 0,6) sau slabi (r

Tabelul 2. Concentrațiile de analiți (± SE) în ser colectate în ziua recuperării țesuturilor la vacile de lapte și junincile care alăptează

VaciPăsări ValoareAnimale, 1617 Glucoza, mmol/l3,42 ± 0,094,11 ± 0,09 6 ng/ml (8,1 ± 0,51 ng/ml, medie ± SE), în timp ce concentrațiile au fost ≤0,22 ng/ml pentru toate animalele în stadii de diferențiere și luteinizare. Diametrul foliculului a crescut semnificativ de la selecție (10,2 ± 0,41 mm) la diferențiere (16,9 ± 0,73 mm)

FIG. 1.Diametrul mediu (± SE)A) măsurată după disecție și concentrațiile de lichid folicular de estradiol (), progesteron (C) și colesterol (D) pentru foliculul dominant nou selectat (Selecție: vaci = 5, juninci = 6), folicul dominat diferențiat (Diferențierea: vaci = 7, juninci = 5), și folicul dominant luteinizat (luteinizare: vaci = 4, juninci = 6) pentru vacile care alăptează (bare negre) și juninci (bare albe). Efectele generale ale tratamentului sunt date în fiecare panou pentru fiecare caracteristică foliculară cu semnificație stabilită la 0,05.