Diferențele sexuale în lipoliza viscerală a grăsimilor și complicațiile metabolice ale arteriosclerozei obezității,

De la Departamentele de Medicină (F.L., V.L., P.A.) și Chirurgie (A.T.), Spitalul Universitar Huddinge și Centrul de Cercetare, Institutul Karolinska, Stockholm (F.L., A.T., V.L., P.A.), Suedia.

Abstract

O explicație plauzibilă a incidenței mai mari a complicațiilor cardiovasculare în obezitatea corpului superior poate fi o secreție crescută de acizi grași liberi (FFA) produse de depozitele de grăsime viscerală prin lipoliză în această regiune. 2 3 S-a demonstrat într-adevăr că subiecții obezi au o eliberare FFA semnificativ mai mare din adipocitele lor viscerale decât martorii slabi. 10 Depozitul de grăsime viscerală are acces direct la ficat prin sistemul venos portal. Creșterea FFA „portal” poate avea o serie de efecte adverse asupra ficatului, cum ar fi o creștere a gluconeogenezei, afectarea metabolismului și acțiunea insulinei și creșterea sintezei lipoproteinelor. 2 3 11 12 Acestea pot, la rândul lor, să contribuie la dezvoltarea intoleranței la glucoză, hipertensiune, dislipoproteinemie și ateroscleroză.

Lipoliza la om este mai presus de toate reglementată de insulină, care inhibă lipoliza și catecolaminele. Efectele catecolaminelor sunt modulate prin patru subtipuri de adrenoceptoare, adică prin stimulare prin β1-, β2- și β3-adrenoceptori și inhibare prin α2-adrenoceptori. 13 Receptorii insulinei și catecolaminelor reglează formarea de AMP ciclic, care la rândul său modulează lipaza sensibilă la hormoni, enzima care activează lipoliza.

Datele in vivo sugerează că reglarea lipolizei este diferită în obezitatea corpului inferior decât în obezitatea corpului inferior. 14 15 16 Dacă există o diferență de gen în mobilizarea FFA din depozitele de grăsime viscerală rămâne de stabilit și, dacă există, trebuie explorate posibilele mecanisme de bază.

Prezentul studiu a fost realizat pentru a investiga posibilele diferențe de sex în caracteristicile clinice și mobilizarea viscerală a FFA prin lipoliză în obezitate. Diferențele de gen pot fi localizate în orice etapă a lanțului de evenimente care transferă semnalul de la receptorii hormonali la lipaza hormonală sensibilă. În consecință, am investigat lipoliza indusă de catecolamină și insulină în celulele adipoase viscerale (omentale) la bărbați și femei obezi.

Metode

Pacienți

Anestezia generală a fost indusă la 8 dimineața printr-un barbituric cu acțiune scurtă și menținută de fentanil și un amestec de oxigen și oxid de azot. Soluția salină intravenoasă a fost administrată înainte ca biopsiile de grăsime să fie luate din omentul major la începutul operației.

Studiul a fost aprobat de comitetul de etică al Institutului Karolinska, Stockholm. Toți pacienții au dat consimțământul informat pentru a participa la studiu.

Izolarea celulelor adipoase și determinări ale dimensiunii și numărului celulei

Experimente de lipoliză și antilipoliză

Experimentele cu insulină au fost concepute pentru a estima efectul antilipolitic al diferitelor concentrații de insulină, variind de la 10 −13 la 10 −9 mol/L, asupra lipolizei induse de norepinefrină în concentrații crescătoare de la 10 −12 la 10 −4 mol/L. Norepinefrina a fost preferată ca inductor lipolitic în aceste experimente, deoarece este agentul lipolitic natural. Experimentele metodologice au relevat că un efect antilipolitic maxim a fost întotdeauna obținut cu 10-9 mol/L de insulină.

Determinarea simultană a eliberării de glicerol și FFA

Procedurile de izolare și incubare a celulelor grase au fost exact aceleași în aceste experimente ca și în experimentele de lipoliză descrise mai sus, cu excepția faptului că albumina serică fără acid gras gras 0,25% (greutate/vol) a fost utilizată ca acceptor al FFA în mediul de incubare . La sfârșitul incubării, o alicotă a mediului a fost îndepărtată pentru determinarea glicerinei, așa cum s-a descris mai sus. O altă alicotă a fost utilizată pentru a măsura eliberarea FFA. Metoda pentru determinarea FFA a fost descrisă în detaliu. 27 Pe scurt, analizele FFA au fost efectuate după cum urmează. Testul a implicat pretratarea cu detergentul SDS pentru a elibera FFA-urile din serul albuminei bovine înainte de activarea acizilor grași de către acil-CoA sintetaza. Această etapă a fost urmată de oxidarea tioesterilor rezultați de acil-CoA oxidază. H2O2 format (reflectând cantitatea de FFA) a fost ulterior măsurat într-o reacție de luminol catalizată cu peroxidază de hrean, folosind un luminometru (LKB Wallac). Lipsa țesutului adipos a redus determinările simultane ale eliberării de FFA și glicerol la 30 din cei 45 de subiecți (18 femei și 12 bărbați).

Testarea activității lipazei sensibile la hormoni

Droguri și produse chimice

Albumină serică bovină (fracția V, lotul 63F-0748), albumina serică bovină fără acid gras (lotul A-6003), Clostridium histolyticum colagenază tip I, glicerol kinază din E coli (G4509), acil-CoA sintetaza (EC 6.2.1.3) din Pseudomonas specii, acil-CoA oxidaza din Candida lipolytica, peroxidază de hrean (EC 1.11.1.7, tip VI; 250-330 U/mg), SDS, ascorbat oxidază, adenozin deaminază, Triton X-100, ATP, forskolin, dibutiril AMP ciclic și 8-bromo AMP ciclic au fost obținute de la Sigma Compania chimică. Norepinefrina și (-) - clorhidrat de izoprenalină provin de la Hässle, sulfat de terbutalină de la Draco, clorhidrat de dobutamină de la Lilly, UK 14304 tartrat de la Pfizer, CGP (±) 12177 [(-) - 4- (3)-t-butilamino-2-hidroxi-propoxi) benzimidazol-2-ona] de la Ciba Geigy și insulina umană de la Novo-Nordisk. Reactivul de monitorizare ATP care conține luciferază licurică provine de la LKB Wallac. Antipain și leupeptină au fost obținute de la Sigma. 1 (3) -Mono (3H) oleoil-2-oleoilglicerol a fost fabricat în Departamentul de Chimie Medicală și Fiziologică, Universitatea Lund, Suedia. Toate celelalte substanțe chimice au avut cel mai înalt grad de puritate disponibil comercial. Colagenaza și alte ingrediente din tampoane au provenit din aceleași loturi pe tot parcursul studiului.

Analize statistice

Valorile sunt date ca medie ± SEM. Valorile EC50 au fost transformate logaritmic pentru a normaliza datele și au fost definite ca sensibilitate subtip β- și α2-adrenoceptor, respectiv. ANCOVA, ANOVA, studentul cu două cozi nepereche t testul și analiza de regresie în trepte au fost utilizate pentru comparații statistice. Toate analizele au fost efectuate cu un pachet software statistic.