Acid hidroxicitric Reducerea picăturilor de lipide prin acumulare prin scăderea aportului de acetil-Coa și
Laborator cheie de fiziologie și biochimie animală, Colegiul de Medicină Veterinară,
Universitatea agricolă din Nanjing, Nanjing, (China)
Tel. (+86) 25-8439 6763, Fax (+86) 25-8439 8669, E-mail [email protected]
Articole similare pentru „”
- Stare de nervozitate
Abstract
Autorii). Editat de S. Karger AG, Basel
Introducere
Obezitatea este una dintre cele mai mari amenințări la adresa sănătății umane, iar problema tot mai mare a obezității este asociată cu morbidități multiple [1], incluzând un risc crescut de diabet, boli cardiovasculare, hipertensiune arterială, boli de inimă și boli ale ficatului gras [2-5]. Aceste boli afectează milioane de persoane care trebuie să-și controleze cu atenție nivelul glicemiei pentru a preveni complicațiile legate de diabet [6, 7]. Biologia obezității este foarte complexă, iar mecanismele care leagă obezitatea de diferite boli sunt slab înțelese [2]. O atenție deosebită s-a concentrat asupra utilizării diferiților compuși bioactivi pentru controlul obezității [8], în timp ce majoritatea acestor studii investighează efectele factorilor asociați metabolismului lipidic asupra controlului acumulării de grăsimi la animale și oameni [7, 9-12]. Recent, a crescut îngrijorarea cu privire la obezitatea asociată cu metabolismul glucozei [13-15].
(-) - Acidul hidroxicitric (HCA) este principalul ingredient activ prezent în coaja de fructe Garcinia Cambogia [16-18]. Studiile anterioare au raportat că (-) - HCA crește pierderea în greutate [19, 20], promovează cheltuielile de energie [21-23], crește rata de sinteză a glicogenului [24] și suprimă de novo sinteza acizilor grași [25-27]. Recent, laboratorul nostru a constatat că (-) - tratamentul HCA a promovat sinteza proteinelor și a sporit cheltuielile de energie la șobolanii masculi [28]. În plus, am constatat, de asemenea, că (-) - HCA a inhibat sinteza acizilor grași prin reducerea aportului de acetil-CoA prin intermediul promovarea ciclului acidului citric și inhibarea expresiei enzimei malice dependente de NADP la puii broiler [29]. Mai mult, studiile anterioare au arătat că (-) - HCA este un puternic inhibitor competitiv al ATP-citrat liază [25, 26, 30-32], o enzimă citosolică (extra-mitocondrială) care catalizează clivajul citratului la oxaloacetat și acetil -CoA, care în cele din urmă limitează disponibilitatea unităților de acetil-CoA necesare pentru sinteza și lipogeneza acizilor grași la animale și oameni [21, 33].
(-) - HCA este similar din punct de vedere structural cu citratul. Citratul este un regulator alosteric pentru o serie de enzime care sunt implicate în metabolismul carbohidraților și grăsimilor, cum ar fi fosfofructokinaza (enzima care reglează glicoliza) [33] și acetil-CoA carboxilaza (enzima care reglează sinteza acizilor grași) [34]. S-a raportat că (-) - HCA are o afinitate mult mai mare față de citratul liază decât cea de citrat [22, 35]. Astfel, (-) - suplimentarea HCA este de așteptat să modifice căile metabolice. Deși unele studii au arătat (-) - HCA posedă activitate anti-obezitate [36, 37] și activitate anti-diabetică [38, 39], sunt disponibile puține informații cu privire la faptul dacă (-) - HCA afectează acumularea de grăsimi la puii broiler prin reglare asupra metabolismului energetic.
Spre deosebire de speciile de mamifere, ficatul este cel mai important organ al de novo sinteza acizilor grași [35, 40] și metabolismul energetic [41] la păsările de curte. Prin urmare, prezentul studiu a fost realizat pentru a investiga efectele (-) - HCA asupra metabolismului lipidic și a metabolismului energetic în hepatocitele primare de pui cultivate, care vor oferi informații utile pentru înțelegerea ulterioară a mecanismelor biochimice asociate cu reglarea acumulării de grăsime prin (- ) - HCA la puiul de pui.
Materiale și metode
Reactivi
Acidul (-) - hidroxicitric (HCA) a fost obținut din standardul de referință USP (SUA). Toate kiturile ELISA de pui au fost achiziționate de la Shanghai Hengyuan Biological Technology Co. (China). Medium 199 a fost achiziționat de la Hyclone Laboratories (Grand Island, NY, SUA); MTT, transferină, tripsină, penicilină și streptomicină au fost achiziționate de la Sigma (SUA). Glutamina și HEPES au fost obținute de la Amresco (Solon, OH, SUA); Kitul de reactivi TRIZOL a fost achiziționat de la Invitrogen (CA, SUA). Transcriptaza inversă M-MLV, inhibitorul RNazei și amestecul de dNTP au fost obținute de la Promega (Madison, SUA) și SYBR Green PCR Master Mix provin de la Roche (Basel, Elveția). Trusa de testare a trigliceridelor și trusa de testare a colorării roșii de ulei au fost cumpărate de la Jian Chen Biotechnology Institution (Nanjing, China).
Izolarea hepatocitelor
Cultura primară a hepatocitelor de pui
Hepatocitele primare de pui au fost semințe în monostraturi în plăci de cultură din plastic cu 6 godeuri sau 96 godeuri (Corning, SUA) cu o densitate de 2 × 106 celule pe godeu în 2 ml sau 1 × 105 celule pe godeu în 100 µL ser- mediu M199 gratuit. S-au adăugat suplimente: incluzând 5 mg/ml transferină, 2 mM glutamină și 1,75 mM HEPES. Mediul de cultură conținea, de asemenea, 100 UI/ml penicilină și 100 μg/ml streptomicină. Hepatocitele au fost incubate la 37 ° C într-o atmosferă de 95% aer și 5% CO2. După 24 de ore de aclimatizare la mediul de cultură, celulele au fost cultivate timp de 24 de ore în mediu roșu fenol și fără FBS M199.
Analiza viabilității celulare
Celulele au fost însămânțate pe plăci cu 96 de godeuri la 1 × 105 celule per godeu și tratate cu 0, 1, 10 sau 50 uM (-) - HCA timp de 1, 3, 6, 12 sau 24 de ore înainte de adăugarea soluției MTT. La fiecare godeu s-au adăugat douăzeci de microlitri de 5 mg/ml MTT. Patru ore mai târziu, mediul de cultură a fost îndepărtat și cristalele formazan albastre formate au fost dizolvate în 150 uL DMSO. Densitatea optică a formazanului generat din MTT a fost măsurată la 490 nm folosind un cititor de microplăci model 550 (Bio-Rad, California, SUA).
Evaluarea ratei mortalității celulare prin testul Lactat dehidrogenazei (LDH)
Celulele au fost crescute în plăci cu 96 de godeuri (1 × 105 celule per godeu) și tratate cu 0, 1, 10 sau 50 uM la 1 × 105 celule per godeu cu 100 culturi de mediu de culturi L pentru 1, 3, 6, 12 sau 24 h. Rata mortalității celulelor a fost evaluată prin cuantificarea eliberării lactatului dehidrogenazei (LDH). Conținutul de LDH a fost determinat folosind kitul de testare a citotoxicității LDH (catalog #: C0016, Beyotine Biotechnology, China), iar procentul mortalității celulelor a fost calculat după cum urmează: [(eliberare experimentală - eliberare spontană)/(eliberare maximă - eliberare spontană)] × 100. Eliberarea spontană și eliberarea maximă au fost obținute prin incubarea celulelor singure sau respectiv cu o soluție 0,1% Triton x-100.