Tratamentul cu ozonoxigen - pneumoperitoneu are ca rezultat remisia completă a celulei scuamoase de iepure

Servicii veterinare și medicină animală de laborator, Universitatea Philipps Marburg, Germania

Departamentul de otorinolaringologie, chirurgia capului și gâtului, Spitalul Universitar Giessen și Marburg, Campus Marburg, Marburg, Germania

Departamentul de Radiologie Diagnostică, Spitalul Universitar Giessen și Marburg, Campus Marburg, Marburg, Germania

Departamentul de Hematologie, Oncologie și Imunologie, Spitalul Universitar Giessen și Marburg, Campus Marburg, Marburg, Germania

Departamentul de otorinolaringologie, chirurgia capului și gâtului, Spitalul Universitar Giessen și Marburg, Campus Marburg, Marburg, Germania

Departamentul de Neuroștiințe Moleculare, Institutul de Anatomie și Biologie Celulară, Universitatea Philipps Marburg, Germania

Department of Molecular Neuroscience, Institute of Anatomy and Cell Biology, Philipps University, Robert - Koch Street 8, 35032 Marburg, Germany Căutați mai multe lucrări ale acestui autor

Servicii veterinare și medicină animală de laborator, Universitatea Philipps Marburg, Germania

Departamentul de otorinolaringologie, chirurgia capului și gâtului, Spitalul Universitar Giessen și Marburg, Campus Marburg, Marburg, Germania

Departamentul de Radiologie Diagnostică, Spitalul Universitar Giessen și Marburg, Campus Marburg, Marburg, Germania

Departamentul de Hematologie, Oncologie și Imunologie, Spitalul Universitar Giessen și Marburg, Campus Marburg, Marburg, Germania

Departamentul de otorinolaringologie, chirurgia capului și gâtului, Spitalul Universitar Giessen și Marburg, Campus Marburg, Marburg, Germania

Departamentul de Neuroștiințe Moleculare, Institutul de Anatomie și Biologie Celulară, Universitatea Philipps Marburg, Germania

Department of Molecular Neuroscience, Institute of Anatomy and Cell Biology, Philipps University, Robert - Koch Street 8, 35032 Marburg, Germany Căutați mai multe lucrări ale acestui autor

Abstract

Carcinoamele cu celule scuamoase ale regiunii capului și gâtului (HNSCC) se metastazează frecvent și prezintă o rată ridicată a mortalității la om și animale. Fiind un model animal acceptat pentru studierea progresiei și răspândirii metastatice a HNSCC, modelul de carcinom auricular VX2 extrem de agresiv și letal al iepurelui White New Zealand (NZW) 1, 2 a fost aplicat în studiul nostru. Acest model tumoral s-a dovedit a fi extrem de potrivit pentru a investiga noi abordări terapeutice, deoarece atât carcinomul HNSCC, cât și carcinomul VX2 sunt similare în creștere, conducând la un ganglion limfatic regional precoce și la o răspândire ulterioară metastatică la distanță. 3-5

Așa cum este adevărat pentru multe tipuri de cancer, celulele tumorale HNSCC evită cumva sistemul imunitar al organismului. Această scăpare imunitară poate fi explicată parțial prin reglarea descendentă sau pierderea frecventă a factorilor determinanți MHC de clasa I 6, 7 și o creștere a celulelor T reglatoare CD4 + CD25 + (Treg) care se găsesc responsabile pentru imunitatea antitumorală deprimată. 8-10 Prin urmare, posibilitatea de a activa imunosupravegherea către celulele tumorale HNSCC ar trebui să ajute la recunoașterea și eradicarea acestei entități tumorale. Îmbunătățirea capacității de imunosupraveghere este un concept emergent în imunoterapiile recente împotriva cancerului, 11-13 în special în cele care se concentrează pe imunomodulatori sau reglatori ascendenți ai răspunsului imun. 14 Pentru a spori răspunsul imun al gazdei împotriva celulelor canceroase, terapiile cu citokine recombinante, imunizarea cu celule dendritice și vaccinarea antigenelor tumorale, precum și imunoterapiile pe bază de celule T sunt în curs de investigare. 15-17

Ozonul, descoperit recent ca fiind produs endogen de granulocite, 18 este un gaz cu influență complexă asupra biologiei radicalilor liberi la om și animale. 19 Majoritatea cercetărilor asupra efectelor biologice ale ozonului s-au concentrat pe toxicitatea pulmonară a acestuia datorită inhalării ozonului ambiental. 20, 21 Prin urmare, aplicarea căilor respiratorii este limitată in vivo studii privind ozonul medical în bolile umane. Interesant este faptul că ozonul a prezentat efecte protectoare puternice asupra sepsisului letal indus de polimicrobieni fără nici o toxicitate pulmonară detectabilă atunci când este aplicat ca amestec de gaze O3/O2 în peritoneu. 22 În plus, dovezile privind formarea de ozon catalizat de anticorpi în uciderea bacteriană 23 sugerează efectele mediată de imunitate ale ozonului produs endogen sau aplicat exogen. Din timp in vitro studiile au descris ozonul ca un gaz radiomimetic, 24 capabil să inhibe în mod selectiv creșterea carcinoamelor alveolare umane, uterine, mamare și endometriale izolate. 25

Acest lucru ne-a determinat să facem ipoteza că aplicarea intraperitoneală a unui amestec medical de gaze O3/O2 stimulează imunosupravegherea antitumorală a organismului.

Material si metode

Animale

Studiul cuprinde 59 de iepuri adulți sănătoși Iffa Credo NZW într-o greutate corporală cuprinsă între 2,0 și 3,0 kg, achiziționate de la Charles River WIGA, Sulzfeld, Germania. Toate animalele au fost ținute în camere cu aer condiționat standardizat: la 20-22 ° C, 50-60% umiditate și un ritm artificial de 12 ore zi/noapte. Fiecare iepure a fost ținut într-o cușcă de oțel individuală, a fost hrănit cu 100 g de pelete dietetice complete pe zi și a avut acces gratuit la apă acidată (acid clorhidrat, pH 2,7) ad libitum. Animalele s-au putut aclima timp de cel puțin 5 zile înainte de începerea procedurii experimentale.

Proiectare experimentală și transplant de tumori

Este prezentat designul experimental al acestui studiu pentru (A) schema de tratament și () rata de reluare după suprimarea imună a iepurilor. * Punctele de timp ale retragerii sângelui

Suprimarea imunitară

Tomografie computerizata

Iepurii au fost premedicați cu 0,1 ml/kg greutate corporală glicopirolat subcutanat și anesteziați cu o combinație de 5 mg/kg xilazină și 30 mg/kg ketamină prin injecție intramusculară. Tomografia computerizată a toracelui a fost generată cu Siemens Somatom Plus 4 (Siemens, Erlangen, Germania).

Parametrii sângelui

Probele de sânge arterial din artera auriculară centrală a urechii libere a tumorii stângi au fost prelevate în ziua 14 post inoculare (direct înainte de prima insuflație de gaze/tratament fals) și în ziua 19 după inoculare (24 de ore după ultima insuflație de gaze/tratament simul) . Au fost prelevate probe de sânge suplimentare în ziua 90 de la animalele O3/O2 - rem (Fig. 1A). Pentru investigații hematologice am folosit un autoanalizator (Vet abc ™ Animal Blood Counter, ABX Diagnostics, Goettingen, Germania), care a fost atent ajustat și validat pentru analiza sângelui de iepure. Pentru numărul de sânge diferențiat, numărul RBC a fost determinat împreună cu hematocritul (HCT) și hemoglobina (HGB). Celulele albe din sânge au fost diferențiate în continuare în granulocite, limfocite și monocite. Datele au fost exprimate ca valori medii ± SEM. Pentru investigațiile de chimie clinică, valorile creatininei, GOT și GPT au fost măsurate cu sistemul Reflovet® Plus (Roche Diagnostics, Mannheim, Germania) pentru a monitoriza funcțiile renale și hepatice.