Structura O-polizaharidei și studii serologice ale lipopolizaharidei Proteus

Krystyna Zych, Andrei Perepelov, Agata Baranowska, Agnieszka Zabłotni, Alexander S. Shashkov, Yuriy A. Knirel, Zygmunt Sidorczyk, Structura O-polizaharidei și studii serologice ale lipopolizaharidei Proteus penneri 60 clasificate într-un nou serogrote Proteus Microbiologie medicală, volumul 43, numărul 3, martie 2005, paginile 351–356, https://doi.org/10.1016/j.femsim.2004.09.004

structura

Abstract

1. Introducere

Bacteriile gram-negative oportuniste în formă de tije din genul Proteus sunt o cauză comună a infecțiilor tractului urinar la persoanele cu tract urinar anormal structural sau catetere urinare pe termen lung [1]. Acestea provoacă bacteriurie semnificativă în principal în vezică, dar au și înclinație pentru rinichi. Infecțiile proteice sunt probabil cele mai cunoscute pentru asocierea lor cu o formare de pietre debilitante la rinichi și vezică urinară [2]. În genul Proteus, există patru specii importante din punct de vedere clinic: Proteus mirabilis, Proteus vulgaris, Proteus penneri și Proteus hauseri [3]. S-au identificat mulți factori de virulență ai acestor organisme, inclusiv mai multe tipuri de fimbrii, hemolizine, flageli, invazivitate, creștere roșie, enzime, inclusiv proteaze și uree, polizaharide capsulare și lipopolizaharide (LPS, endotoxină) [4, 5].

Specificitatea serologică a tulpinilor Proteus este definită de structura chimică a lanțului O-polizaharid al LPS (antigenul O). Pe baza antigenelor O, tulpinile a două specii, P. mirabilis și P. vulgaris, au fost clasificate mai întâi în 49 O-serogrupuri [6] și mai târziu în 11 serogrupuri suplimentare [7]. Au fost propuse aproximativ 15 serogrupuri suplimentare pentru a treia specie importantă din punct de vedere medical, P. penneri [8, 9]. O-polizaharidele celor mai multe tulpini P. penneri studiate până acum sunt acide datorită prezenței acizilor uronici și a diferitelor componente acide fără zahăr, precum aminoacizii, acizii lactici și piruvici și grupările fosfat [8-12]. Raportăm acum despre structura unei alte O-polizaharide fosforilate acide izolate din tulpina P. penneri 60. Pe baza structurii chimice unice a O-polizaharidei și a unei reactivități serologice slabe a O-antiserului împotriva P. penneri 60 cu Proteus LPS, tulpina P. penneri 60 a fost clasificată într-un nou serogrup Proteus O70 separat.

2. Materiale și metode

2.1 Tulpini bacteriene și creștere

Proteus penneri 60 a fost izolat din urina unei femei cu bacteriurie într-un spital din Łódz (Polonia). P. vulgaris O8 (17/57), O15 (30/57) și O19 (37/57) provin din Colecția Națională Cehă de Culturi de Tip (CNCTC, Institutul de Epidemiologie și Microbiologie, Praga, Republica Cehă).

Bacteriile au fost cultivate pe bulion de nutrienți (Laboratorul Varșovia din Sera și Vaccinuri, Polonia) suplimentat cu 1% glucoză. Masa bacteriană uscată a fost obținută din cultura aerată așa cum s-a descris anterior [13].

2.2 Izolarea și degradarea lipopolizaharidei

LPS a fost izolat din celulele bacteriene uscate de P. penneri 60 prin extracție cu fenol apos fierbinte [14] și purificat prin tratament cu 50% CCl3CO2H apos rece (4 ° C) urmat de dializă a supernatantului. Randamentul LPS a fost de 4,6% din masa bacteriană uscată (g/g).

Hidroliza acidă ușoară a LPS (100 mg) a fost efectuată cu HOAc apos 2% la 100 ° C până la precipitarea lipidei A. Precipitatul a fost îndepărtat prin centrifugare (13.000 g, 20 min), iar supernatantul a fost fracționat prin cromatografie cu permeație pe gel ( GPC) pe o coloană (56 × 2,6 cm) de rășină Sephadex G-50 (S) (Pharmacia, Suedia) în tampon acetat de piridiniu 0,05 M (pH 4,5), cu monitorizare utilizând un refractometru diferențial Knauer (Germania). Randamentul oligozaharidei rezultate a fost de 17% din greutatea LPS.