Frontiere Dezvoltarea și caracterizarea rapidă a liniei de translocare specifică cromozomului
Reproducere a plantelor
Editat de
Rodomiro Ortiz
Universitatea suedeză de științe agricole, Suedia
Revizuite de
Isabelle Colas
Institutul James Hutton, Regatul Unit
Galina Suvorova
Institutul de Cercetare All-Russia pentru leguminoase și culturi de gât, Rusia
Afilierile editorului și ale recenzenților sunt cele mai recente oferite în profilurile lor de cercetare Loop și este posibil să nu reflecte situația lor în momentul examinării.
- Descărcați articolul
- Descărcați PDF
- ReadCube
- EPUB
- XML (NLM)
- Suplimentar
Material
- Citarea exportului
- Notă finală
- Manager de referință
- Fișier TEXT simplu
- BibTex
DISTRIBUIE PE
Cercetare originală ARTICOL
- 1 Institutul Național de Biotehnologie Agroalimentară, Mohali, India
- 2 Școala Absolventă a Agriculturii Unite, Universitatea Tottori, Tottori, Japonia
- 3 Northwest Institute of Plateau Biology (CAS), Qinghai, China
- 4 Indian Institute of Wheat and Orley Research, Indian Council of Agricultural Research, Karnal, India
Introducere
Materiale și metode
Materiale vegetale
Materialele vegetale utilizate în acest studiu au inclus (1) linia de adaos disomic de Th. elongatum cromozomul 1E și linia de substituție disomică a Th. elongatum cromozomul 1E cu cromozomul 1D de grâu, atât în fundalul primăverii chinezești (CS), (2) stocuri genetice zero pentru cromozomul 1A și tetra pentru cromozomul 1D (N1AT1D), N1AT1B, N1BT1A, N1BT1D și N1DT1B în fundalul CS și (3) patru soiuri: AcDomain-hard canadian, Norin 61 (N61) -soft japonez, PBW343-hard indian, Cham 6-hard sirian.
Generarea unei linii de translocare specifice cromozomilor
Căutarea markerilor proteici specifici cromozomului a fost realizată din tipare electroforetice ale gluteninei și proteinelor gliadinei Th. elongatum linii de adiție și substituție și șosete genetice nulli tetra ale CS. Pentru crearea liniei de translocație, DSL-1E (1D) a fost încrucișat reciproc cu N1AT1D pentru a crea monosomice duble pentru cromozomul 1E și 1A. Generația F1 a fost încrucișată/încrucișată cu soiurile N61, CHAM6, PBW343, AcDomain și cu Ph Eu linie mutantă (promovează împerecherea și recombinarea homoeologă). Selecția s-a bazat pe prezența HMW-GS și absența gliadinelor din Th. elongatum și absența gliadinelor codificate 1AS din grâu. Confirmarea translocării a fost efectuată prin analiza GISH. Plantele cu vigoare ridicată au fost selectate și s-au efectuat cicluri suplimentare de încrucișare/încrucișare și autoing.
Caracterizarea proteinelor
Proteinele de stocare a semințelor au fost extrase secvențial în conformitate cu Smith și Payne (1984) cu modificări. Inițial, extracția gliadinei a fost realizată cu 1,5 M DMF (dimetil formamidă), urmată de extracția gluteninei cu 50% izopropanol, 50 mM TrisHCl (pH 7,5), 2% DTT. Separarea gluteninelor a fost efectuată pe gel de poliacrilamidă 10%. Gliadinele au fost separate pe geluri de poliacrilamidă 15%.
Cromatografie lichidă de înaltă performanță în fază inversă (RP-HPLC)
RP-HPLC a proteinelor gliadinei și gluteninei separate a fost efectuată în conformitate cu Mejias și colab. (2014) cu unele modificări. Separarea proteinelor a fost realizată folosind coloana analitică C8 în fază inversă Zorbax 300SB-C8 (Agilent Technologies) cu dimensiunea particulelor de 5 μm și diametrul particulelor de 300 Å, lungimea de 250 mm, diametrul intern de 4,6 mm al sistemului de cromatografie cu lichid cuaternar Agilent 1260 Infinity. Detectorul a fost un detector UV-vis cu matrice de diode și absorbanța a fost detectată la 210 nm. Volumul injecției a fost de 20 μl. Gradientul liniar a fost stabilit utilizând solvenții A (0,1% TFA în MQ) și B (0,1% TFA în Acetonitril) și temperatura coloanei a fost stabilită la 60 ° C. Gluteninele au fost separate la un gradient liniar de 25-44% B timp de 120 min, 44-50% B timp de 5 min și, în cele din urmă, 50-65% B timp de 5 min. Gliadinele au fost separate de la 20 la 65% B timp de 120 min și apoi de la 65 la 75% B timp de 20 min.