Efectele obezității și exercițiului asupra transducției semnalului leptinei testiculare și testosteronului

Departamentul de Kinesiologie, Universitatea Sportivă Shenyang, Shenyang, Liaoning, China;

Departamentul de Educație Fizică, Universitatea Minnan Normal, Zhangzhou, Fujian, China; și

Colegiul PE al Universității Normale din Beijing, Beijing, China

Departamentul de Kinesiologie, Universitatea Sportivă Shenyang, Shenyang, Liaoning, China;

Adresa pentru solicitări de reimprimare și alte corespondențe: B. Chang, Departament. of Kinesiology, Shenyang Sport Univ. 36 din Jinqiansong E. Rd., Sujiatun Dist., Shenyang, Liaoning, China (e-mail: [email protected]).

Abstract

Animale.

Pentru acest studiu, au fost obținuți 45 de șoareci C57BL/6J de sex masculin nou înțărcați de 4 până la 5 săptămâni (masa corporală: 15,10 ± 0,32 g) de la Beijing Vital River Laboratory Animal Technology (Beijing, China) cu numărul permis SCXK (Beijing) 2014 -0001. Experimentele pe animale au fost efectuate în conformitate cu Managementul și utilizarea animalelor experimentale promulgat de Ministerul Sănătății din Republica Populară Chineză în 1998. Toate experimentele din acest studiu au fost aprobate de comitetul de etică al Universității Sportive Shenyang. S-au făcut toate eforturile pentru a reduce la minimum numărul animalelor folosite și suferința lor. Animalele au fost adăpostite la temperatura camerei (22 ± 5 ° C), o umiditate relativă de 50 ± 10%, un ciclu lumină-întuneric de 12/12 h și li s-a furnizat hrană și apă ad libitum. Fiecare cușcă nu adăpostea mai mult de cinci șoareci, iar apa potabilă și așternutul erau schimbate de două ori pe săptămână.

Conținutul nutrițional al dietei normale cu conținut scăzut de grăsimi (ND) și HFD a fost descris anterior (24). Pe scurt, ND cu conținut scăzut de grăsimi conținea 6% ulei de rapiță și 30,5% amidon de grâu în greutate, iar HFD conținea 21% unt limpezit și 15,5% amidon de grâu în greutate. Celelalte conținuturi nutriționale ale celor două diete erau identice; energia digerabilă pentru ND și HFD cu conținut scăzut de grăsimi a fost de 16,1 și respectiv 19,4 MJ/kg. Dietele au fost obținute de la Jianmin (Shenyang, China).

Configurarea modelului de obezitate la șoarece indusă de HFD.

Din cei 45 de șoareci masculi C57BL/6J, 10 animale selectate aleatoriu au fost desemnate ca grupul ND și hrănite cu ND, iar restul de 35 de șoareci au fost desemnate grupul HFD și hrănite cu HFD. După 10 săptămâni, cu excepția a patru șoareci care nu au dezvoltat obezitate, greutatea medie a șoarecilor rămași a fost> 120% din cea a grupului de control normal (NC), îndeplinind standardul pentru un model de obezitate animală (6). Șoarecii din grupul HFD au fost subdivizați în mod aleatoriu în următoarele trei grupuri: 10 șoareci din grupul de control al obezității (OC), 10 șoareci din grupul de exerciții cu volum moderat de obezitate (OME) și 11 șoareci în exercițiul cu volum mare de obezitate ( Grup OHE). Greutatea șoarecilor din cele trei grupuri nu a diferit semnificativ ( > 0,05). Șoarecii din grupul ND cuprindeau grupul NC (Fig. 1).

FIG. 1.Gruparea animalelor. Pentru acest studiu, șoareci de sex masculin C57BL/6J de 4 până la 5 săptămâni ( = 45) au fost împărțite aleatoriu în dietă normală (ND; = 10) și dietă bogată în grăsimi (HFD; = 35) grupuri. După 10 săptămâni de intervenție dietetică, 4 șoareci care nu au dezvoltat obezitate au fost excluși din grupul HFD și restul de 31 de șoareci au fost subdivizați în continuare în controlul obezității (OC; = 10), obezitate exercițiu cu volum moderat (OME; = 10), și obezitate exerciții cu volum mare (OHE; = 11) grupuri.

Intervenție de exerciții (înot).

Timp de 2 zile, șoarecii din grupurile OME și OHE au primit mai întâi 10 minute de antrenament de înot pentru a se adapta, urmat de începutul antrenamentului propriu-zis. Această intervenție de exercițiu sa bazat pe cea dintr-un raport anterior cu ușoare modificări (23). Pe scurt, șoarecii din studiul anterior au fost supuși la două sesiuni de înot de 60 de minute/zi timp de 5 zile/săptămână peste 18 săptămâni, care a fost considerat un program de antrenament moderat (23). În comparație, șoarecii din grupul OME din prezentul studiu au fost exercitați o dată pe zi (dimineața), 6 zile/săptămână pentru un total de 8 săptămâni; în prima zi, li s-a permis 20 de minute de înot gratuit, care a fost mărit cu 10 min/zi până când timpul de antrenament a ajuns la 120 min/zi la sfârșitul celei de-a doua săptămâni, după care acest volum a fost menținut pentru restul de 6 săptămâni . Șoarecii din grupul OHE au fost exercitați de două ori pe zi (o dată dimineața și o dată după-amiaza, cu un decalaj de 6 ore între ele), 6 zile/săptămână pentru un total de 8 săptămâni; durata și intensitatea fiecărui antrenament au fost aceleași ca și în grupul OME, dar volumul total de exerciții a fost dublu față de cel al grupului OME. Șoarecii au fost lăsați să înoate liber fără intervenție într-o piscină de plastic de 45 cm lungime și 60 cm adâncime cu o temperatură a apei de 32 ± 1 ° C.

Colectie de mostre.

La 36-48 de ore după ultimul exercițiu de către grupurile OME și OHE, șoarecii au fost posti timp de 12 ore și anesteziați cu o injecție intraperitoneală de etil carbamat (5 mg/kg corp greutate). Sângele a fost colectat din plexul venos orbital, iar serul a fost separat și depozitat la -80 ° C până la testare. În același timp, testiculele, epididimidele și veziculele seminale au fost izolate și cântărite rapid, iar spermatozoizii din epididim au fost numărați și motilitatea lor a fost evaluată (24, 34). Testiculul izolat a fost răcit rapid prin plasare în azot lichid și apoi depozitat într-un congelator de -80 ° C. În cele din urmă, țesutul adipos din jurul testiculelor, rinichilor și mezenterului a fost cântărit ca conținut de grăsime abdominală.

Cauda epididimului numărului de spermatozoizi și măsurători ale motilității.

Un epididim a fost obținut de la fiecare șoarece și plasat în 1,0 ml tampon HEPES. Epididimul a fost apoi tăiat la joncțiunea dintre corpid și epididimul cauda, iar cauda a fost plasat într-un puț cu tampon HEPES de 1,0 ml. Cu ajutorul foarfecelor, epididimul cauda a fost tăiat în segmente și presiunea a fost aplicată ușor, astfel încât materialul seminal din interiorul canalului deferent a fost eliberat și amestecat cu tamponul.

Numărul de spermatozoizi și motilitatea au fost evaluate în conformitate cu orientările Organizației Mondiale a Sănătății (34) (≥200 de spermatozoizi numărați pentru fiecare probă). Numărul de spermatozoizi (în celule/μl) a fost determinat folosind un hemocitometru (15 μl/parte). Motilitatea spermatozoizilor a fost evaluată orbește la microscopul cu lumină prin clasificarea a 200 de celule de spermă/animal ca fiind mobil progresiv, neprogresiv sau imobil. Motilitatea a fost apoi exprimată ca procent din totalul motilului (spermă mobilă progresivă și spermă mobilă neprogresivă) (24).

Măsurarea hormonilor.

Izolarea ARN și analiza PCR în timp real.

Analiza Western blot.

analize statistice.

Datele sunt exprimate ca mijloace ± SE. Comparații multiple de grup au fost efectuate utilizând ANOVA unidirecțional, urmată de un test post-hoc Student-Newman-Keuls pentru a efectua comparații multiple. Datele de corelație au fost determinate de corelația Pearson. Rezultatele au fost considerate semnificative pentru valori ale