Relația cauză-efect între hiperfibrinogenemie și boala vasculară Blood American Society of

• Ecran divizat
• Pictogramă Partajare Acțiune
  • Facebook
  • Stare de nervozitate
  • LinkedIn
  • E-mail
• Pictogramă Instrumente Instrumente

  • Bryce Kerlin, Brian C. Cooley, Berend H. Isermann, Irene Hernandez, Rashmi Sood, Mark Zogg, Sara B. Hendrickson, Michael W. Mosesson, Susan Lord, Hartmut Weiler; Relația cauză-efect între hiperfibrinogenemie și boala vasculară. Blood 2004; 103 (5): 1728–1734. doi: https://doi.org/10.1182/blood-2003-08-2886

    

    Descărcați fișierul de citare:

    Abstract

    Nivelurile plasmatice crescute de fibrinogen sunt asociate cu prezența bolilor cardiovasculare, dar este controversat dacă fibrinogenul crescut conferă în mod cauzal un risc crescut și, ca atare, este un adevărat modificator al bolilor cardiovasculare sau este pur și simplu asociat cu boala. Investigând un model transgenic de șoarece de hiperfibrinogenemie, am arătat că concentrația plasmatică crescută de fibrinogen (1) determină depunerea crescută de fibrină în organe specifice, (2) interacționează cu un modificator independent al activității hemostatice pentru a regla rotirea/depunerea fibrinei, (3) exacerbează neointimalul hiperplazia într-un model experimental de remodelare vasculară indusă de stază, totuși (4) poate suprima generarea de trombină ca răspuns la o provocare procoagulantă. Aceste descoperiri oferă dovezi experimentale directe că hiperfibrinogenemia este mai mult decât un produs secundar al bolilor cardiovasculare și poate funcționa independent sau interactiv pentru a modula severitatea și/sau progresia bolii vasculare.

    Introducere

    Șoarecii modificați genetic descriși recent, cu niveluri crescute de fibrinogen plasmatic cronic, în absența inflamației subiacente, oferă un nou instrument experimental pentru a investiga relația cauză-efect dintre hiperfibrinogenemie și boala vasculară. 18 Tulpina de șoarece mutant (denumită în continuare șoareci Hifib) a fost derivată prin microinjecția pronocleară a ovocitelor a întregului locus fibrinogen al șoarecelui, incluzând toate cele 3 lanțuri de fibrinogen, precum și câteva kilobaze ale secvenței flancante. Alela transgenică adăugată a fibrinogenului este moștenită într-o manieră mendeliană, iar șoarecii au prezentat niveluri de fibrinogen plasmatic crescut de aproximativ 2 ori, dar nu au prezentat semne evidente de boală și au prezentat performanțe reproductive normale. 18 Hiperfibrinogenemia dependentă de transgen nu a avut niciun efect asupra aterogenezei induse de dietă la șoarecii C57Bl6 19 sau la șoarecii transgenici ApoE * 3-Leiden. 20

    Obiectivul studiului actual a fost să investigheze dacă fibrinogenul crescut cronic la șoarecii Hifib (1) determină creșterea depunerii de fibrină intravasculară sau modificarea fluctuației fibrinei (ogenilor); (2) modifică formarea plachetelor-trombului ca răspuns la leziunea endotelială acută; (3) afectează incidența sau amploarea trombozei induse de stază și a remodelării vasculare; sau (4) mărește tromboza la șoareci cu o stare hipercoagulabilă subiacentă. Ultimul obiectiv a fost abordat prin încrucișarea șoarecilor Hifib cu o tulpină de șoarece modificată genetic care transportă o mutație (TMPro) în gena trombomodulinei (TM), 21,22 pentru a produce șoareci Hifib/TMPro. Mutația TMPro reduce drastic activitatea cofactorului TM în activarea dependentă de trombină a proteinei C și astfel determină o stare hipercoagulabilă. Prin urmare, analiza șoarecilor Hifib/TMPro ne-a permis să investigăm consecințele hiperfibrinogenemiei la animale care au prezentat o susceptibilitate crescută la tromboză.

    Materiale și metode

    Animale transgenice

    Model de leziuni carotide acute

    Leziunea arterială indusă de FeCl3 a fost indusă conform procedurilor publicate. 24,25 Artera carotidă comună stângă a fost expusă prin disecție contondentă și fluxul sanguin a fost înregistrat cu sonde de flux Doppler (model 0,5VB; Transonic Systems, Ithaca, NY) poziționate în jurul capătului distal al arterei. La zece minute după plasarea sondei, o bandă de hârtie de filtru de 1,0 × 0,6 mm 2 înmuiată în 20% FeCl3 a fost aplicată pe suprafața adventitială a arterei timp de 1 minut. Câmpul a fost spălat cu ser fiziologic și fluxul a fost monitorizat continuu. În unele experimente, procedura a fost apoi repetată pe carotida comună dreaptă. Timpii de ocluzie au fost exprimați ca t75, timpul la care fluxul amplitudinii pulsului a scăzut la 25% din debitul inițial, definit ca debitul mediu care apare între minutul 2 și minutul 4 după accidentare. Datele au fost evaluate pentru semnificația statistică prin analiza Wilcoxon a sumelor de rang și testul Student t.

    Ligarea arterei carotide

    Artera carotidă comună stângă a fost disecată și fluxul sanguin a fost întrerupt permanent prin aplicarea unei ligaturi strânse în apropierea bifurcației carotide așa cum este descris. 26 După 4 săptămâni, toate animalele au fost perfuzate la presiune fiziologică cu 4% paraformaldehidă în tampon fosfat de sodiu 0,1 M, pH 7,3. Arterele carotide comune stânga și dreapta au fost disecate, încorporate în parafină, iar secțiunile seriale (5-μm grosime) au fost tăiate la intervale de 150 μm pe toată lungimea vasului. Imaginile digitalizate ale acestor vase au fost analizate folosind software-ul de analiză a imaginii (NIH Image 1.60; National Institutes of Health, Bethesda, MD) așa cum este descris. 26

    Determinarea nivelurilor de fibrinogen plasmatic, a complexelor trombină-antitrombină, dimerul D, depunerea fibrinei tisulare și generarea de trombină in vitro

    Rezultate

    Metabolismul fibrinei (ogenilor) este modificat la șoarecii hiperfibrinogenemici

    Nivelurile de fibrinogen plasmatic la șoarecii Hifib în vârstă de 8 până la 16 săptămâni, determinate de ELISA, au fost de aproximativ 1,5 ori mai mari decât la șoarecii de tip sălbatic (3,5 ± 0,4 versus 2,4 ± 0,4 mg/mL ± SD; P ≤ .0005; n = 12/grup). Valorile obținute prin ELISA s-au corelat cu cantitatea de proteină coagulabilă întreagă în plasma săracă în trombocite. Nivelurile de fibrinogen la șoarecii TMPro și Hifib/TMPro au fost aceleași ca la șoarecii de tip sălbatic și respectiv la șoarecii Hifib, demonstrând că mutația TMPro nu modifică nivelurile de fibrinogen din mediul înconjurător.

    Nivelurile plasmatice ale produsului divizat de fibrină D-dimer au fost substanțial crescute la șoarecii Hifib (Figura 1) comparativ cu șoarecii de tip sălbatic (40 ± 17 față de 7,9 ± 2 μg/mL ± SD; P ≤ .0005) și au fost, de asemenea, mai mari decât cele măsurate la animalele TMPro (16,6 ± 6 μg/mL ± SD, P ≤ .005). Reconstituirea probelor de plasmă de la șoareci cu deficiență de fibrinogen cu fibrinogen de șoarece purificat la concentrații de până la 5 mg/ml nu a dat un semnal de dimer D detectabil. În mod similar, scăderea plasmei normale de șoarece cu fibrinogen în exces pentru a obține o concentrație plasmatică de 5 mg/ml nu a modificat concentrația măsurată a dimerului D. Aceste experimente de control elimină posibilitatea ca creșterea aproximativ 5 ori a dimerului D la șoarecii Hifib să fie atribuită reactivității încrucișate a anticorpilor de testare cu fibrinogen de șoarece. La șoarecii Hifib/TMPro, nivelurile dimerilor D au fost și mai crescute (93 ± 40 μg/mL ± SD). Aceasta arată că creșterea concentrației plasmatice a fibrinogenului a provocat în sine generarea crescută de produse de degradare a fibrinei și - prin inferență - formarea crescută a fibrinei. Acest efect este clar observat la șoarecii Hifib și este mai pronunțat la animalele Hifib/TMPro, demonstrând că ambele mutații interacționează într-o manieră sinergică în ceea ce privește cifra de afaceri a fibrinei (ogenilor).

    ---