Facilitatea Proteinelor a Iowa State University Office of Biotechnology SDS-PAGE și

Centrul de proteine ​​al
Biroul de biotehnologie al Universității de Stat din Iowa

  • Servicii
    • Documentare și analiză gel 1D și 2D
    • Electroforeza pe gel 2-D
    • Cromatografie lichidă de înaltă performanță (HPLC)
    • Servicii de hibridom
    • Digestie în gel și soluție
    • Focalizare isoelectrică (IEF)
    • Analiza masei MALDI
    • Sinteza peptidelor
    • Secvențierea proteinelor/peptidelor
    • Q Spectrometrie de masă tandemă activă (LC-MS/MS)
    • SDS-PAGE și Electroblotting
    • Synapt G2-Si HDMS
    • Sistem de imagistică a taifunului
  • Instrumentaţie
  • Taxe
  • Formulare de depunere
    • Creați formulare de depunere
  • Personal
  • Seminarii
    • Seminarii viitoare
    • Seminarii anterioare
  • Manuale/Știri/Informații
    • Manuale
    • Știri
    • informatii suplimentare
  • Link-uri

SDS-PAGE și Electroblotting

În prezent, folosim un sistem de celule cu placă dublă Mini-PROTEAN II și un sistem de celule de transfer electroforetic Mini Trans-Blot, ambele de la Laboratoarele Bio-Rad.

Următoarea este o descriere generală a SDS-PAGE și blotting pentru analiza aminoacizilor și secvențierea proteinelor N-terminale.

SDS-PAGE
Electroforeza pe gel de poliacrilamidă cu dodecil sulfat de sodiu (SDS-PAGE) în prezența unui agent reducător (2-mercaptoetanol) este o tehnică pentru separarea subunităților polipeptidice în funcție de greutatea lor moleculară. Protocolul implică denaturarea probei de proteine ​​prin încălzirea acesteia în prezența SDS și a unui agent reducător. SDS se va lega de proteină provocând desfășurarea acesteia, în timp ce agentul reducător va reduce legăturile disulfură intramoleculare și intermoleculare. Legarea SDS de către proteină conferă o sarcină negativă netă și polipeptida denaturată va migra printr-un gel de procent cunoscut de acrilamidă în prezența unui câmp electric aplicat spre electrodul pozitiv (anod). După terminarea electroforezei, gelul este colorat cu Coomassie "Blue R-250 pentru a vizualiza benzile polipeptidice. Greutatea moleculară a polipeptidei este invers proporțională cu mobilitatea sa. Greutatea moleculară a subunității polipeptidice poate fi estimată direct dintr-un semilog graficul greutății moleculare a proteinelor standard față de mobilitatea lor sau dintr-un grafic al jurnalului greutății moleculare față de mobilitate Separarea proteinelor prin SDS-PAGE este o tehnică excelentă pentru producerea proteinelor „purificate” individual.